特别提示:包括快速Pfu DNA聚合酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:快速Pfu DNA聚合酶
英文名称:Fast Pfu DNA Polymerase
产品货号:JN0027
产品规格:250U
Pfu DNA聚合酶为Z常用的高保真DNA聚合酶,在需高保真的PCR反应中广范使用,然而Pfu酶扩增灵敏度不高,延伸速度缓慢(1kb/分钟)给众多的使用者带来了不便。针对普通Pfu酶的扩增缺陷, 百奥莱博采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造,制备的新型聚合酶Fast Pfu酶具有快速、高灵敏度、抗干扰能力强等特点,是新一代的高保真DNA聚合酶。使用Fast Pfu能获得更理想的扩增结果,并大幅度缩短扩增反应时间。
产品组成:
组份 | JN0027-250U |
Fast Pfu DNA 聚合酶(5U/μl) | 50μl |
dNTP混合液(各10mM) | 200μl |
5×Fast Pfu Buffer with Mg2+ | 2ml |
产品特点:
1、高保真:具有同Pfu酶相同的保真度,为普通Taq酶的10倍。
2、快速:Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍,72℃保温30秒可延伸1kb以上。
3、GX:以λDNA为模板,扩增长度可达12kb,能GX扩增≤6kb片段;对于人基因组DNA等复杂模板,能有效扩增出3kb特定基因片段。
4、高灵敏:可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出1.2kb特定基因片段(图例一)。同样条件下对于基因组DNA的扩增显著优于普通Pfu酶。
5、独特配方的5×Buffer:使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、GX。
产品用途:用于要求保真度比较高的PCR反应,包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成、DNA末端补平等。
使用建议:
Fast Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端,无3′端"A"突出,除使用BalbRec 一步定向无缝克隆外,其它PCR产物的克隆方案有:
1、PCR前引物进行5′端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中。
2、将产物3′末端加A后再与T载体连接。
注意:由于Fast Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′ 端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度,理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′→5′ 外切酶活性引起的引物降解,尽量在冰上配制反应体系,并加入Fast Pfu酶。
应用实例:
图例一) 50μl扩增体系中,分别以50ng~0.05ng人基因组DNA为模板,可对特定基因片段(1.2kb)进行很好的扩增。
泳道1:50ng;泳道2:5ng;泳道3:0.5ng;泳道4:0.05ng;泳道M:DNA Ladder 2000
质量保证:经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留,无核酸内、外切酶污染。
活性定义:在74℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入 反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。
常用反应体系(50μl)
组分 | 体积 |
5×Fast Pfu Buffer* | 10μl |
上游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) |
下游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) |
dNTP(各10mM) | 1.0μl |
模板 | 1-50ng(质粒) |
10ng-1μg(基因组) |
Fast Pfu | 0.25μl(1.25U) |
ddH2O | 至50μl |
*Mg2+终浓度为2mM |
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温馨提示:不可用于临床ZL。