急性脊髓损伤(ASCI)大鼠模型

• 编号DSI545Ra01
• 物种Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
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• 规格每例
• 价格¥ 720

基础信息

• 原型物种人
• 来源Allen’s法导致脊髓损伤
• 模式动物品系SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为180g~200g
• 实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
• 实验周期4w
• 建模方法1.取正常大鼠腹腔麻醉(350mg/kg)，将大鼠俯卧，固定于大鼠固定板上，在背部脊髓两侧触摸大鼠Z下肋与软组织分界处(浮肋与第 13胸椎连接处)作为骨定位标志，向上、下5 cm 范围备皮、脱毛后常规消毒，铺无菌手术单，在后正中线做纵行切口，大约 3cm，依次切开皮肤、皮下筋膜，暴露椎旁肌，约平对第 10 胸椎棘突，钝性剥离肌肉暴露棘突、椎板和横突。参考定位：T9棘突倾向尾侧，T10 棘突中立位，T11 棘突倾向头侧。
  2.确定 T10胸椎位置，用骨剪在 T9 与 T10、T10与T11 棘突及相应椎板之间分别做两个横行剪口，再在 T10 胸椎两侧，横突与椎板连接处做纵行剪口，形成一个方形剪口界线，然后用咬骨钳咬住 T10 胸椎棘突用力拉起即“揭盖”，去除 T10 椎板，形成方形骨窗，修整骨窗边缘，充分暴露 T10对应的脊髓。
  3. 用Allen' s 撞击器制备脊髓损伤动物模型，打击时，用拉钩拉开脊髓两侧软组织，牵拉固定，使脊柱稳定，不受呼吸运动影响，使 20 g 重量的击打棍从 3 cm 高度自由落体，致伤能量 60 g·cm，撞击T10 骨窗对应的脊髓，造成急性脊髓损伤，击打脊髓后，击打棍不动，停留 3 min 再移开。
  4. 撞击成功标准为：撞击脊髓组织水肿、出血，硬脊膜完整呈紫红色，紧张，膨隆，大鼠尾巴出现痉挛性摆动，双下肢躯体回缩样扑动，呈迟缓性瘫痪。常规分层缝合后回笼饲养。
  5. 术后4W，腹腔注射麻醉大鼠后，将大鼠固定于固定板上，暴露脊髓 T8～ T12，迅速取出脊髓组织，固定 4 h，石蜡包埋切片(厚4um)，HE染色，观察病理改变。
• 应用疾病模型

模型评价

1. 术后一般情况观察 ：各损伤组大鼠的术后基本情况基本一致，打击后大鼠均表现为身体痉挛性颤动，尾巴痉挛性摆动，双下肢及躯体回缩样扑动。麻醉苏醒后大鼠双下肢呈弛缓性瘫痪，可出现尿潴留或尿失禁。解剖可见伤后大鼠硬脊膜内充血或水肿。
2.做BBB评分：0分：无可见后肢运动，1分：一或两个关节轻微运动，通常为髋和/或膝关节，都可认为造模成功；
3.斜板实验：将大鼠身体垂直于斜板的纵轴放置，斜板由自制的表面粗糙的木板制成，大鼠利用前肢和后肢的力量保持身体停留自斜板上。斜板每次升高或降低5度，以保证大鼠能停留在斜板上5秒，以能停留5秒的角度为其功能值。
4.BDA示踪术：术后5W，将大鼠麻醉后固定在脑立体定位仪上，纵行切开颅顶区头皮，剪开骨膜并推向四周，消毒棉签擦拭颅骨，参考大鼠脑离体定位图谱，以前囟为原点，共选择 8 个位置钻孔，微量进样器将5% BDA 溶液1μL注射入大鼠脑运动皮质区，进针深度自颅骨表面起始约3.5mm，微量注射泵设置注射时间为5min，（留针5min）注射完毕后缝合头皮。2w后取损伤节段以下脊髓组织标本进行BDA 荧光染色，观察皮质脊髓束神经纤维。
5.大鼠坐骨神经荧光金逆行追踪：各组随机取大鼠，麻醉后沿股外侧肌间隙显露坐骨神经，通过组织钳钳夹挫伤坐骨神经，在避光条件下使用微量注射器在坐骨神经挫伤区多点注射2%荧光金，每侧坐骨神经注射0.4ul，注射速度为0.1ul/min。每注射位点留针5min，切口内撒8*104U的青霉素粉剂，逐层缝合切口，造模后正常饲养。1周后予脊髓损伤处取材进行组织学检查。进行冰冻切片，20um切片，每组每只动物5张切片，荧光显微镜下观察荧光金标记细胞的分布情况。

组织病理学

HE 染色可以观察到假手术组灰、白质组织结构基本完整,神经细胞在灰质中分布均匀、胞体饱满、形态正常、细胞膜完整，白质内神经纤维排列整齐, 细胞间质均匀。SCI 组可见灰、白质组织结构不完整，损伤区灰质可见大片出血、大片坏死灶 、细胞肿胀、有的出现囊腔，白质内神经纤维排列不规则。

统计学分析

应用SPSS软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（x ±ｓ）表示，采用ｔ检验，组间比较采用单因素方差分析，P<0.05表示有显