转染技术服务

细胞转染及筛选稳定细胞系
定义：
细胞转染是指将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。
分类：
常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染两类。
瞬时转染的外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元 件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白等来帮助检测。
稳定转染的外源DNA可以整合到宿主染色体中。通常需要通过一些选择性标记，如新霉素抗性基因(APH；neo），潮霉素抗性基因（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选， 得到稳定转染的同源细胞系。

筛选稳定细胞系的实验流程：
1. 筛选浓度测定：以10～14天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度；
2. 细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%～80%覆盖；
3. 细胞转染（脂质体）；
4. 利用质粒上含有的抗性选择进行筛选；
5. 鉴定筛选结果。        

   
相关要求（客户提供）：
1.生长状况良好的细胞株，细胞特性，培养条件及相关注意事项；公司可负责代购；
2.转染级别质粒，包括质粒大小，浓度，抗性等相关背景资料；
 
交付结果：
1. 具体实验报告（包括实验步骤和主要仪器及试剂说明）；
2. 目的质粒转染前后细胞培养图片和荧光图片；
3. 稳定筛选的细胞株，培养条件和培养图片；
4. 实验中没有用完的由客户提供的质粒等。