外泌体蛋白组学定量分析

‍外泌体定义：

       外泌体（Exosome）是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体 )的直径30-150nm的纳米级脂质包裹体结构，密度1.13-1.21g/ml，内部包裹了蛋白质、mRNA和microRNA等物质。包括肿瘤细胞在内的大多数类型的细胞，都可以产生并释放外泌体。外泌体由细胞分泌释放出来，在血液等体液内传播，又可被其他细胞吞噬，是细胞间通讯的重要介质。

——F1000 Biol Rep. 2011.PMID: 21876726

 

       外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等，而不同组织来源的外泌体在内容物组成和功能方面存在差异，同时这种差异受到细胞外基质和微环境的动态调控。越来越多的证据表明，宿主细胞或肿瘤细胞分泌的外泌体参与了肿瘤发生、生长、侵袭和转移。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、LX评价和预后分析。
 

目前，外泌体研究主要集中在以下几个方向：

• 开发疾病诊断和预后标志物

• 揭示疾病发病机制

• 作为药物载体，实现靶向给药

• 作为疾病ZL的靶点

• 参与免疫反应调控

外泌体蛋白质服务：

       华盈生物根据主流外泌体研究策略，开发了一套完整的外泌体蛋白质组学研究技术服务体系。提供从外泌体收集、鉴定到蛋白质组定性定量、数据分析一系列的技术服务项目，确保外泌体研究在同样技术标准下获得高质量研究数据。
 

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一、外泌体收集‍

 
        对于外泌体研究，分离和收集合格的外泌体是非常关键的一步。目前对于外泌体收集有：超速离心、密度梯度离心、超滤、磁珠免疫、聚合物沉淀与试剂盒提取法等几种主要方法，各种方法均存在不同优缺点。
 

 
       华盈生物在现有试剂盒法的基础上进行大量技术优化，形成了一套针对不同样品的外泌体提取试剂盒和配套收集方法。可以在提高外泌体收集丰度的同时，显著减少杂蛋白残留，以保证蛋白质组分析阶段获得的数据更加稳定和可靠。
 

华盈生物外泌体试剂盒优势：‍

  a)  外泌体结构完整；
  b)  外泌体粒径更加均一；

  c)  外泌体丰度高；
  d)  高丰度蛋白去除效果更显著；

  e)  操作简单，省时省力。 ‍

二、外泌体鉴定

       华盈生物可提供一整套的外泌体鉴定服务项目，包括：外泌体电镜扫描、Nanosight粒径分析、外泌体标志物Western Blot鉴定等。
 

1、电镜观察

        鉴于透射电子显微镜(TEM)的工作特点，在外泌体研究中，能够直接观察到样品中外泌体的形态。并且TEM具有很高的分辨率，能够鉴别大小不一的外泌体。

• 实验流程：外泌体制样→电镜观察→拍摄图片→选择图片

• 实验安排：每组拍摄一例样品

• 实验结果：每例样本提供不少于5张电镜原始照片

2、Nanosight粒径分析

        纳米微粒追踪分析术(Nanosight)可以实时地观测外泌体粒径区间，并计算每例样品中外泌体颗粒数，为外泌体的定性和定量提供关键数据，是目前外泌体研究ZD推荐的检测技术。

• 实验流程：外泌体制样→上机检测→数据分析→出具报告

• 实验安排：每例样品均需进行Nanosight粒径分析

• 实验结果：中文实验流程与数据分析报告

           NanoSight纳米颗粒测量仪
 

      
                  单样品1000倍稀释NTA测量数据
 

3、Western鉴定

        华盈生物优选了多种外泌体表面maker和抗体，如CD9(24kDa)、CD63(30-60kDa)、TSG101(45kDa)等，可提供多种外泌体常见marker的Western blot检测服务。

实验流程：外泌体蛋白提取→marker选择→Western blot实验→灰度图

实验安排：每例样品均需进行Western blot鉴定分析

实验结果：提供Western Blot灰度图
 

         华盈生物拥有蛋白质谱和抗体芯片两种蛋白质组学检测平台，两种技术平台各具特点，优势互补，我们根据研究人员具体研究目推荐适合的技术平台。‍
 

样本要求：

四、高级生信分析‍

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参考文献：

1. Ander Arbelaiz, et al. Serum extracellular vesicles contain protein biomarkers for primary sclerosing cholangitis and cholangiocarcinoma. Hepatology. 2017.

2. Chen I H, et al. Phosphoproteins in extracellular vesicles as candidate markers for breast cancer. Proc Natl Acad Sci USA, 2017.

3. Haraszti R A, et al. High-resolution proteomic and lipidomic analysis of exosomes and microvesicles from different cell sources. J Extracell Vesicles, 2016.

4. Hurwitz S N, et al. Proteomic profiling of NCI-60 extracellular vesicles uncovers common protein cargo and cancer type-specific biomarkers. Oncotarget, 2016.

5. Clark D J, et al. Redefining the breast cancer exosome proteome by tandem mass tag quantitative proteomics and multivariate cluster analysis. Anal Chem, 2015.

6. Hoshino A, et al. Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis. Nature, 2015.