SABC免疫组化试剂盒(小鼠/兔IgG)(DAB显色)怎么卖

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名称：SABC免疫组化试剂盒(小鼠/兔IgG)(DAB显色)怎么卖
编号：QN1223
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
英文名：SABC(Mouse/Rabbit IgG)-POD Kit
规格：100T-200T
本试剂盒适合于一抗为小鼠/兔IgG的免疫组化实验，DAB显色。

试剂盒组份：
封闭液(5% BSA)——————————10ml
3% H2O2-—————————————10ml
Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液—————200ul
SABC-POD浓缩液——————————100ul
稀释液——————————————30ml
20×DAB显色液A——————————1ml
20×DAB显色液B——————————1ml

SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质(IP=10)，经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤:(以石蜡切片为例)
1. 切片常规脱蜡至水(三次二甲*，三次乙醇)。
2. 3% H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3. 可选步聚：
a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸*缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾 后断电，间隔5-10分钟后，反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。
b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS(pH7.2-7.4)洗涤2-3次。
c、跳过此步，直接进入下一步。
4. 滴加5% BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。
5. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周)，也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 孵育1小时左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。
6. 根据用量，用稀释液将Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液按1:50-100稀释成工作液(1ml稀释液加入10-20ul Bio-羊抗小鼠/兔IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加Bio-羊抗小鼠/兔IgG工作液,20-37℃ 孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次，每次2分钟。
7. 根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ul SABC-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加SABC-POD工作液,20-37℃，30分钟。PBS (pH7.2-7.4)洗涤4次，每次5分钟。
8. DAB显色:根据用量，用PBS(pH7.2-7.4)配制，按1ml PBS加入50ul 20×DAB显色液A，加入50ul 20×DAB显色液B 。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3% H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：如果染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

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·碘化硫代乙酰胆碱
编号：QN0682
英文名称：ACETYLTHIOCHOLINE IODIDE
规格：1g
本品是乙酰胆碱酯酶的底物，烟*(代"碱")性乙酰胆碱受体激动剂。常用于色度法测定乙酰胆碱酯酶的活性。

CAS号：1866-15-5
分子式：C7H16INOS
分子量：289.18
储存条件：2～8℃

·维生素C*
编号：QN0105
英文名称：L-Ascorbic Acid Sodium Salt
规格：25g|100g

别名：抗坏血酸*;L-抗坏血酸*
CAS号：134-03-2
分子式：C6H7NaO6
分子量：198.1
储存条件：室温避光
性状：白色或极微黄色结晶或结晶性粉末

·L(+)鼠李糖
编号：QN0175
英文名称：L(+)rhamnose monohydrate
规格：5g
别名：异甜糖;6-脱氧-L-甘露糖
CAS号：10030-85-0
分子式：C6H12O5·H2O
分子量：182.17
储存条件：室温干燥保存
纯度：≥99%
性状：白色粉末
溶解性：溶于水，参考浓度50mg/ml

·Hoechst 33342 染色液(即用型)
编号：QN1322
英文名称：Hoechst 33342 Stain solution(ready-to-use)
规格：10ml|50mL
本Hoechst 33342染色液为即用型，可直接用于固定细胞或组织的细胞核染色，也可直接用于活细胞或组织的细胞核染色。

Hoechst 33342，也称bisBenzimide H 33342或HOE 33342，是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342也常用于普通的细胞核染色，或常规的DNA染色。Hoechst 33342的ZD激发波长为346nm，ZD发射波长为460nm;Hoechst 33342和双链DNA结合后，ZD激发波长为350nm，ZD发射波长为461nm。

使用说明：

1. 对于固定的细胞或组织：
a. 对于细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
b. 对于贴壁细胞或组织切片，加入少量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可;对于悬浮细胞，至少加入待染色样品3倍体积的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。
c. 吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。
d. 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。细胞发生凋亡时，会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染。

2. 对于活细胞或组织：
a. 加入适当量Hoechst 33342染色液，必须充分覆盖住待染色的样品，通常对于六孔板一个孔需加入1ml染色液，对于96孔板一个孔需加入100微升染色液。
b. 在适宜于细胞培养的温度下培养20-30分钟。弃染色液，用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。

注意事项：
1、荧光染料都存在淬灭的问题，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光衰减封片剂。建议染色后尽量当天完成检测，活细胞或组织染色后应立即观察。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

储存条件：-20℃避光，有效期一年。


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