高保真平末端pfu DNA聚合酶 核酸扩增(PCR)

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北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应高保真平末端pfu DNA聚合酶 核酸扩增(PCR)，产品信息：

类别：核酸扩增(PCR)

英文名：pfu DNA Polymerase

编号：RFT101

品Pai：百奥莱博

规格：100U(40μl)|5×100U(5×40μl)

英文名：pfu DNA Polymerase

本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶，该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外，还具有很强的3’-5’外切酶活性，增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比，pfu聚合酶热稳定性更好，更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A，为平滑末端，要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。

试剂盒组成：

pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl

10×pfu PCR buffer(含Mg2＋)—————————1ml

活性定义：1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：

1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

注1：如果需要改变Mg2+浓度，根据下表调节

注2：配制反应液时，请ZH加入pfu，因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性，有可能降解引物。

2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。

3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。

4、PCR仪上执行以下程序：

注：PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定ZJ的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：

1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性，所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb；同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物，所以应ZH把pfu 酶到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。

2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对 pfu 酶的活性无影响。

储存条件：-20℃，有效期一年。

高保真平末端pfu DNA聚合酶 核酸扩增(PCR)专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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