2×富含GC PCR MasterMix品Pai

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应2×富含GC PCR MasterMix品Pai，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：2×富含GC PCR MasterMix品Pai
编号：WE0116
规格：1ml
产地：国产|进口
品Pai：百奥莱博
  本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可ZD限度地减少人为误差和污染。经过优化的缓冲液配方使酶的作用发挥ZD功效，实现对复杂模板的高保真、GX率扩增，的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于对保真性要求较高的PCR反应和结构复杂的模板如GC含量高，有二级结构等的扩增，对简单模板有效扩增的片段可达20kb，对复杂模板可达10kb。

产品组成：

 

组份	1ml
2×GC-Rich PCR MasterMix	1ml
ddH2O	1ml

注意：2×GC-Rich PCR MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×GC-Rich PCR MasterMix	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司的2×富含GC PCR MasterMix品Pai，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·RNA样本保存液
编号：WE0404
英文名称：RNAstore
规格：100ml|500ml
本产品是一种新型的RNA稳定试剂，可迅速渗入组织保护RNA。其迅速的保护作用确保了下游基因表达分析结果的准确性。该试剂保护后的样本可长期保存，即使是多次反复冻融RNA也不会降解。经保护的RNA在37℃下可保存2天，18-25℃下可保存7天，2～8℃下可保存4周，-20℃或-80℃条件下可长期保存。经该产品保存的组织可用于所有关于RNA的后续实验，包括总RNA的提取，micro RNA的提取，mRNA的提取等。

·Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式检测试剂盒
编号：WE0328
英文名称：Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
规格：50次
  本试剂盒是一种采用Annexin-PE与7-AAD双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
  细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝*酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性，对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。7-AAD是一种核酸染料，可进入死细胞内与DNA结合，能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色。7-ADD与PI有着相似的荧光特性，但其发射波谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的ZJ替代品，因此通常将Annexin V-PE与ADD配合染色，以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。

试剂盒组成：

组份	50次
4×Binding Buffer	10ml
7-AAD Viability Staining Solution	500μl
Annexin V-PE	250μl

注意事项：
1、消化细胞时不能用含EDTA的胰酶。
2、本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
3、需自备PBS和去离子水。
4、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
5、请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤：

1、细胞样品的准备：
a．对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50μl左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。
b．对于悬浮细胞：1000×g左右离心3-5分钟，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约50微升左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，并转移到1.5毫升离心管内。再次离心沉淀细胞，小心吸除上清，可以残留约50μl左右的PBS，以避免吸走细胞。再次加入1ml 4℃预冷的PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞。

2、用去离子水按1:3稀释Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去离子水)。
3、用250μl Binding Buffer重新悬浮细胞，调节其浓度为1×106/ml。
4、取 100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。
5、混匀后于室温避光孵育 15 分钟。
6、在反应管中加400μl PBS，流式细胞仪(FACS)分析。

实验图例：

Jurkat细胞用顺铂诱导凋亡后用Annexin V-PE/7AAD双染流式分析图谱

储存条件：2～8℃，避光保存


2×富含GC PCR MasterMix品Pai关键词：2×富含GC PCR MasterMix,2×GC-rich PCR MasterMix,WE0116


·唾液基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0184
英文名称：Saliva DNA Extraction Kit
规格：50次|200次
  本试剂盒适合于从新鲜唾液或唾液/保存液混合液中提取基因组DNA。本产品纯化过程不需使用*酚或*仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀。优化的缓冲体系使DNAGX特异地结合到硅基质离心吸附柱上，PCR和其他酶促反应的YZ剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，ZH使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer GL	25ml	100ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml	52ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml	10ml
Buffer GE	15ml	60ml
蛋白酶K	2×25mg	180mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml	2×5ml
吸附柱DM及收集管	50套	200套

自备试剂：无水乙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/9ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解，使其浓度为20mg/ml。配制好的蛋白酶K -20℃保存，勿长时间室温放置，以免影响其活性。其他组分可以在干燥、室温(15-25℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间，可置于2～8℃。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、DY次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
5、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在第3步中加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225。
6、若要在室温下长时间保存唾液DNA，推荐使用本公司的唾液DNA保存管(货号：WE0402)。

操作步骤：
1、加入唾液样本或唾液/保存液混合液400μl 。
注意：
1)加入保存液的唾液混合物需在提取前50℃水浴1小时或50℃空气温箱2小时。
2)如需要增加样本体积，则倍比增加步骤2-4中的蛋白酶K 、Buffer GL和无水乙醇的体积，步骤5中液体可分多次转入。
2、加入40μl 蛋白酶K 。
3、加入400μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀，56℃水浴15-30分钟。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号：WE0225)，涡旋15秒，室温放置2分钟。
4、短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入400μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心。
注意：
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
3)GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
5、上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Column DM)中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(～13400 ×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)Buffer GE在65-70℃水浴预热，离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。


2×富含GC PCR MasterMix品Pai关键词：2×富含GC PCR MasterMix,2×GC-rich PCR MasterMix,WE0116


·FastStar热启动DNA聚合酶
编号：WE0122
英文名称：HotStar DNA Polymerase
规格：500U|2500U
  HotStar DNA Polymerase是抗Taq酶单克隆抗体和WE0101 Taq DNA Polymerase的混合制品，适用于Hot Start PCR。使用Taq酶抗体进行PCR扩增时，高温变性前由于Taq酶抗体与Taq酶结合YZDNA聚合酶活性，能够在低温条件下有效YZ引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。Taq酶抗体在PCR反应最初的DNA变性步骤中变性，DNA聚合酶活性恢复，达到热启动效果。使用本品无需特殊地对Taq酶抗体失活处理，可以在常规PCR反应条件下使用。
  HotStar DNA Polymerase具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切酶活性，无3"→5"外切酶活性，酶延伸速度2 kb/min，可以扩增长度达5 kb的片段。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点，主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。

产品组成：

组份	500U	2500U
HotStar DNA Polymerase, 5 U/μl	100μl	5×100μl
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM*离子。

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
HotStar DNA Polymerase,5U/μl	0.25-0.5μl	1.25-2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：可以在室温下配制反应液，须将试剂置于冰上。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司正在打折促销核酸扩增(PCR)全系列产品，恭候您的咨询选购2×富含GC PCR MasterMix品Pai。