2×富含GC PCR MasterMix 核酸扩增(PCR)

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北京百奥莱博专业生产供应2×富含GC PCR MasterMix 核酸扩增(PCR)，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：2×富含GC PCR MasterMix 核酸扩增(PCR)
编号：WE0116
规格：1ml
英文名：2×GC-rich PCR MasterMix
品Pai：百奥莱博
产地：北京
  本品是由Bes Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可限度地减少人为误差和污染。经过优化的缓冲液配方使酶的作用发挥功效，实现对复杂模板的高保真、GX率扩增，的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定，重复性好。本品不含染料，PCR程序结束后可根据需要加入适量上样缓冲液后进行电泳操作。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于对保真性要求较高的PCR反应和结构复杂的模板如GC含量高，有二级结构等的扩增，对简单模板有效扩增的片段可达20kb，对复杂模板可达10kb。

产品组成：

 

组份	1ml
2×GC-Rich PCR MasterMix	1ml
ddH2O	1ml

注意：2×GC-Rich PCR MasterMix含有Bes Taq DNA Polymerase,3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×GC-Rich PCR MasterMix	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	＜0.5μg	＜0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，Bes Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

关于2×富含GC PCR MasterMix 核酸扩增(PCR)的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以Z饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
SV0061 AscI RE-Mix限制性内切酶 AscI RE-Mix Restriction Endonuclease
KFS303 双荧光素酶报告基因检测试剂盒 Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
HR0141 线粒体蛋白提取试剂盒 Mitochondrial protein extraction kit
YT921 Bcl-2YZ剂(ABT-737) Bcl-2 Inhibitor
BTN130646 尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG) Uracil DNA Glycosylase
HR0503 细菌活性检测试剂盒-CCK8 Bacterial activity assay kit -CCK8
SV1482 BL21 (DE3) E. coli 感受态细胞
YT266 YY1凝胶迁移突变探针(1.75μM) YY1 Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
BTN80806 大肠杆菌TOP10化学感受态细胞 E.coli TOP10 Chemical Competent Cell
ALH180 尿液DNA提取试剂盒 Urine DNA Extraction Kit
SV0755 TseI限制性内切酶 TseI Restriction Endonuclease
WE0254 BL21(DE3)pLysS感受态细胞 BL21(DE3)pLysS Competent Cell
BTN130956 柱式酱油DNA提取试剂盒 Soy sauce DNA column extraction kit
SY0226 RORβ-GFP报告基因质粒 RORβ GFP Reporter Plasmid
RFT155 PAGE预制胶(8-16%)
KFS200 Caspase 2分光光度法检测试剂盒 Caspase-2 Colorimetric Assay Kit
SY0439 人源氧化低密度脂蛋白 Human Ox-LDL
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·罗丹明标记驴抗小鼠IgG(H+L)
编号：WE0367
英文名称：Donkey Anti-Mouse IgG,Rhod(TRITC)Conjugated
规格：100μl
本产品为TRITC标记的经抗原亲和纯化的驴抗体，特异识别小鼠IgG重链和轻链，检测灵敏度高，本底低，稳定性好。

荧光素标记抗体广泛应用于免疫学的研究。TRITC(四甲基异硫*酸罗丹明)为罗丹明的衍生物，激发后呈现明亮的橙红色荧光。与FITC的黄绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。

免疫原：小鼠IgG
缓冲液：0.01M PBS，50%甘油，pH7.6
稳定剂：15 mg/ml BSA(不含IgG和蛋白酶)
防腐剂：0.05%叠氮*
荧光团：TRITC，Amax=550; Emax=570
应用范围：对于大多数实验(1：50-200)

·血清血浆尿液游离RNA提取试剂
编号：WE0201
英文名称：RNAtiqu Circulating RNA Extraction Reagent
规格：50ml
  本品特别适用于从血清、血浆中分离纯化包括microRNA和其他小RNA(<200nt)在内的总RNA。本品灵活处理不同起始量的样品，在有效裂解样本的同时，可有效保存RNA的完整性，提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，提取的RNA可用于RT-PCR、Northern Blot和分子克隆等下游实验。

自备试剂：*仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水(新开封或提取RNA专用)。

实验前准备及重要注意事项：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
③ 配制溶液应使用无RNase的水。
④ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、本品中含有*酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院ZL。
4、样品用游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂匀浆后，如不即刻加入*仿，置于-70℃可放置一个月以上。
5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2～8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。
6、若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I(货号：WE0213)对RNA进行处理。

操作步骤：
1、取200μl新鲜或者冻存的血清或血浆，加入3倍体积的游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂。振荡30秒，充分混匀。
注意：样本加入游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂后，可能会出现沉淀，经过振荡混匀后，沉淀基本消失。若仍有少量沉淀，不影响下游实验，可继续操作。
2、将处理后的样品在室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、向以上溶液中加入*仿，每使用1ml血清/血浆样本专用总RNA提取试剂加入0.2ml*仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3分钟。
注意：如不能涡旋混匀，可手动快速颠倒混匀2分钟。
4、4℃ 12000rpm离心20分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA 主要在水相中，把水相转移到一个新的无RNase的离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置30分钟。或-20℃沉淀过夜，效果更佳。
6、4℃ 12000rpm 离心20分钟，弃上清。
注意：离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
7、加入75%乙醇(用无RNase的水配制)洗涤沉淀。每使用1ml游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂加入1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
8、4℃ 12000rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。
注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。
9、室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

储存条件：2～8℃。


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·Rosetta(DE3)感受态细胞
编号：WE0250
英文名称：Rosetta(DE3)Competent Cell
规格：100μl×10支
  本产品是采用进口Rosetta菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的热击转化。Rosetta菌株是携带*霉素抗性质粒BL21的衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107。

产品组成：

组份	0.1ml×10支
Rosetta(DE3)Competent Cell	10×100μl
Control DNA pUC19，0.1ng/μl	10μl

实验前准备及重要注意事项
1、感受态细胞一定要用干冰运输。感受态细胞应在-80℃下保存，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2、转化所有步骤均在无菌条件下操作。
3、包装中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供对照试验使用。

使用方法：
1、取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2、待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3、42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4、向每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150 rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5、根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
注意：
1)涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2)新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

储存条件：-80℃。

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