全基因组扩增试剂盒 核酸扩增(PCR)

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名称：全基因组扩增试剂盒 核酸扩增(PCR)
编号：JN0114
产地：国产|进口
  全基因组扩增试剂盒基于多重链置换扩增的Phi29 DNA聚合酶等温扩增体系，Phi29 DNA聚合酶是从Bacillus subtilis噬菌体Phi29中克隆出的嗜温DNA聚合酶，利用基因重组技术，在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Phi29 DNA聚合酶具有很强的链置换活性，可实现对DNA复杂结构的解链与复制。同时具有GX的DNA合成能力，可连续合成多达70kb的DNA片段。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’→5’外切酶活性，保真度高于绝大多数高保真酶，因此Phi29 DNA聚合酶特别适合用于全基因组扩增。
  本试剂盒可以实现少量DNA样本的全基因组无差别扩增，一个反应可以达到40ug的全基因组DNA。本试剂盒要求DNA样品不能严重降解，以减少因模板量太少造成不平衡扩增。扩增产物可以稀释后用于后续的DNA分析。

试剂盒组成：

 

组份	体积
10×BalbAmpBuffer	1ml
Primer mixture（1mM）	20ul
dNTPs（10mM）	200ul
100×BSA	100ul
BalbAmpPhi29 Enzyme	25ul
ddH2O	1ml

试剂盒特点：
1、高覆盖度：经过扩增后可达到95%以上覆盖度。
2、高均一度：无偏好扩增，可实现全基因组的均一扩增。
3、高保真：具有很强的校正功能，保真度高。
4、高灵敏：可实现极少量样本的全基因组扩增。

实验方案：
1、配制以下反应体系：

试剂	体积
10×BalbAmp Buffer	5ul
Primer mixture（1mM）	1.25ul
模板	1ul
加ddH2O至	45ul

2、95℃预变性3min，然后冰上冷却。
3、加入以下成分：

试剂	体积
dNTPs(各10mM)	2.5μl
100× BSA	0.5μl
BalbAmpPhi29 Enzyme

4、30℃反应3h或者过夜。
5、扩增产物是高浓度基因组DNA，需要将扩增产物用无菌水或者TE缓冲液进行稀释后进行下游实验。

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BL1390 SABC兔IgG-FITC/POD双标kit
BL1246 MTT溶液(0.5%)
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F020105 兔抗鸡卵清蛋白抗体 Rabbit Anti-OVA
ARB12543 大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免费代测 Rat insulin-like growth factor binding protein 1,igfbp-1 ELISA KIT
ARB10600 人血小板碱性蛋白(PBP/CXCL7)Elisa定量检测 Human platelet basic protein,pbp ELISA KIT
BL0874 羊抗马IgG免疫血清 0.5ml
BTN100874 DNA尿素-PAGE上样液 DNA Urea-PAGE Loading Buffer
对称二*乙炔 Fmoc-Met-OH 501-65-5
PY01-145  猪胆粉  100克  
6915-15-7 DL-Malic acid DL-苹果酸
DAB法显色试剂盒"
005001 4%兔红细胞
ARB11016 人补体蛋白4(C4)含量分析 Human complement 4,c4 ELISA KIT
A9016-32 兔血清 100ml|500ml
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·DY链cDNA合成试剂盒
编号：JN0002
英文名称：BalbScript 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix
规格：50次|100次
  本试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板，GX合成DY链cDNA。本试剂盒使用M-MuLV反转录酶（JN0011），它的RNA酶H的活性与AMV反转录酶相比较低。该反转录酶可耐受42-50℃温度.试剂盒中含有重组RNA酶YZ剂（E055），可耐受55℃高温，有效防止RNA降解。试剂盒同时含有Oligo(dT)18，只以有poly(A)尾巴的mRNA为模板合成cDNA，使用本试剂盒也可采用序列特异性引物。合成的DY链cDNA能直接用作PCR或荧光定量PCR的模板，第二链cDNA的合成或线性RNA扩增，也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记DY链cDNA的实验。

试剂盒组成：

组份	JN0002-20次	JN0002-100次
M-MuLV反转录酶（200 U/μl）	25μl	120 μl
RNA酶YZ剂(40 U/μl)	25 μl	120 μl
5xM-MuLV Buffer	150 μl	500 μl
dNTP（10mM）	50 μl	250 μl
Oligo(dT)18（100 μM）	25 μl	120 μl
GAPDH正向引物(10 uM)	20 μl	20 μl
GAPDH反向引物(10 uM)	20 μl	20 μl
Water，nuclease-free	2x1.25 ml	2x1.25 ml

注：2×RT-PCR Reaction Buffer中包含Taq DNA聚合酶、dNTP、Mg2+、RNase Inhibitor以及反应缓冲液。

注意事项：
1、用DEPC处理实验用到的所有管子和枪头，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，整个实验过程戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
3、纯化过的RNA要保证不含有盐，金属离子，乙醇和*酚，因为以上成分会干扰DY链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。

实验步骤：
I.DY链cDNA合成
1、融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心，离心后置于冰上。
2、按顺序加入下表中的反应物。
3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将模板和引物的混合液轻轻混匀，短暂离心，65℃孵育5分钟，冰上冷却，离心，再置于冰上冷却。
4、轻轻混匀，离心。
5、如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物，42℃孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物，25℃.先孵育5分钟，随后42℃孵育60分钟。
6、70℃加热5 min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应或者在-20℃保存少于一周的时间。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。

II.DY链cDNA的PCR扩增
合成的DY链cDNA可直接用于PCR或qPCR。DY链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中，DY链cDNA反应液加入2μl。

应用实例：

图例一）小鼠胚胎肝脏总RNA抽提。
按百奥莱博RNA抽提试剂盒操作说明书抽提，起始组织量50mg；


图例二）百奥莱博DY链cDNA合成后PCR扩增目的基因。
泳道1：某进口品Pai；泳道2：百奥莱博DY链cDNA合成试剂盒扩增结果。（1ug总RNA反转录后，取1ul用于PCR检测，目的基因：GAPDH）

常用反应体系（20μl）

模板RNA	总RNA（0.1 ng～5 μg） poly(A) mRNA（10 pg～0.5 μg） 特异性RNA（0.01 pg～0.5 μg）
引物	Oligo (dT)18引物1μl 随机六聚体引物1 μl 基因特异性引物15～20 pmol
5×Reaction Buffer	4ul
RNA酶YZ剂(20U/ul)	1ul
dNTP(各10mM)	2.0μl
M-MuLV反转录酶（200U/ul）	1μl
ddH2O(Nuclease Free)	至20μl

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·DNA Ladder 3000
编号：JN0097
规格：500μl(100次)
  本DNA Marker为预混1×Loading Buffer的DNA溶液，可直接电泳。

片段组成：
100bp,250bp,500bp,750bp,1000bp（加亮）,1500bp,2000bp,3000bp，其中1000bp条带浓度加倍，约为30 ng/μl，显示 为亮带，使电泳结果更容易辨认，亦可用于定量。其它各条带浓度约 为10 ng/μl。

储存条件：-20℃，有效期2年。

图1：DNA Marker电泳图


图2：DNA Marker条带示意图


表1：DNA Marker选择指南

目的条带分子量范围 （推荐琼脂糖%）	标准分辨率	高精分辨率
1500bp以下 (1.0%到2.0% Agrose)	200bp DNA Ladder	100bp DNA Ladder
	200bp DNA Ladder Plus	100bp DNA Ladder Plus
	100bp DNA Ladder ODD	DNA Ladder 2000 Plus
	100bp DNA Ladder ODD Plus	DIY DNA Marker(条带任选)
	DNA Ladder 2000
1500bp以上 (0.7% Agrose)	DNA Ladder 3000	1kb DNA Ladder I
	DNA Ladder 5000	1kb DNA Ladder II
	DNA Ladder 9000	1kb DNA Ladder Plus I
	DNA Ladder 10000	1kb DNA Ladder Plus II
	λ/Hind III DNA Marker	DIY DNA Marker(条带任选)

表2：DNA Marker系列一览表

DNA Marker	条带组成(bp)	琼脂糖(%)
100bp DNA Ladder	100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000	1.5%
100bp DNA Ladder Plus	100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1200、1500、2000	1.0%
100bp DNA Ladder ODD	100、300、500、700、900、1100、1500	1.5%
100bp DNA Ladder ODD Plus	100、300、500、700、900、1100、1500、2000、3000	1.0%
200bp DNA Ladder	200、400、600、800、1000、1200、2000	1.5%
200bp DNA Ladder Plus	200、400、600、800、1000、1200、2000、3000、5000	1.0%
DNA Ladder 2000	100、250、500、750、1000、2000	1.0%
DNA Ladder 2000 Plus	100、250、500、750、1000、2000、3000、4000、5000	1.0%
DNA Ladder 3000	100、250、500、750、1000、1500、2000、3000	0.7%
DNA Ladder 5000	100、250、500、750、1000、1500、2000、3000、5000	0.7%
DNA Ladder 9000	500、1000、2000、3000、5000、9000	0.7%
DNA Ladder 10000	500、1000、2000、4000、7000、10000	0.7%
1kb DNA Ladder I	500、1000、 2000、3000、4000、5000、6000、8000	0.7%
1kb DNA Ladder Plus I	100、250、500、750、1000、1500、 2000、3000、4000、5000、6000、8000	0.7%
1kb DNA Ladder II	500、1000、 2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000	0.7%
1kb DNA Ladder Plus II	100、250、500、750、1000、1500、 2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000	0.7%
λ/Hind III DNA Marker	125、564、2027、2322、4361、6557、9416、23130	0.6%
DIY DNA Marker(条带任选)	100、200、250、300、400、500、600、700、750、800、900、1000、1100、1200、1500、 2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000等24个fregment任选	详情请参考说明书

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