北京PFG固定液价格

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、YL及其他非科研用途。

北京PFG固定液价格的品Pai：百奥莱博，是优质的细胞生物学试剂产品，用于生化研究，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多PFG固定液等细胞生物学试剂产品请联系我司咨询订购。

名称：北京PFG固定液价格
产地：国产|进口
规格：250mL
英文名：PFG Fixative Solution
品Pai：百奥莱博
PFG固定液为对*醌、戊二醛、多聚甲醛混合固定液。本产品可有效阻止醛基对抗原的损害，又不影响超微结构的保存，故适于多肽类抗原的免疫细胞化学，尤其是免疫电镜的研究。

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

北京PFG固定液价格极具性价比，此外，我公司正火爆促销以下产品：

·电泳级SDS溶液(10%)
编号：BTN100881
英文名称：SDS Solution，EG
规格：250mL
本产品是电泳级的SDS溶液，专门用于配制SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE凝胶，也可用于制备变性上样液。当SDS与蛋白质的重量比超过4：1时(一般终浓度为0.1%即可)，就能够打开蛋白质的二级结构，并且使蛋白质的在SDS-PAGE胶中的泳动速度只取决于分子大小。如果蛋白质含有二硫键，必须在上样液中补充足够b-巯基乙醇。

储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

·Zenker固定液
编号：BTN131223
英文名称：Zenker Fixative Solution
规格：250mL
Zenker固定液是常用的混合型固定液，是细胞学及病理学常用的固定剂之一，由重铬酸*、生汞、乙酸和水混合而成。用该固定液固定的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别是要显示免疫球蛋白、病毒包涵体(如Negri小体)、骨骼肌的横纹等组织时，应用本液可获得良好的结果。

产品特点：
1．Zenker固定液对细胞核固定效果较好，较适合于造血和网状内皮组织等样品的固定。
2．Zenker固定液不能用于保存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。对含血量较多的组织标本不建议使用Zenker液固定。
3．常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。
4．固定时间一般需要12-24小时。

产品组成：

 

成分	规格
溶液A	250ml
溶液B	15ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

使用方法：
1．配制适量体积的Zenker 固定液，按照19:1的比例将溶液A和溶液B混合，搅拌均匀，所得溶液即为Zenker 固定液工作液。注：Zenker 固定液工作液建议即配即用。
2．标本修块，置入Zenker 固定液工作液内固定12～24h(根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异)。
3．固定后，用流水冲洗12h，或者亚硫*(代"酸")*溶液冲洗，也可用1%的*水溶液洗涤。在70%酒精脱水时加入碘(配成0.5%碘酒)脱汞。
4．常规方法脱水、透明。

注意事项：
1．由于Zenker 固定液中含*化汞，固定后必须脱汞。
2．固定后，组织必须用流水冲洗去除重络酸*否则乙醇脱水会引起络显色。
3．本固定液不能用金属容器盛放，组织固定后，也不能用金属镊夹取。


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·Tris盐*(代"酸")溶液(1M,pH6.5)(不含RNase)
编号：BTN60704
英文名称：RNase-Free Tris-HCl Solution
规格：250mL

·一站式DNA非变性PAGE电泳套装
编号：BTN100205
英文名称：One-Stop DNA Native PAGE Pack
规格：30次
本品就是专门用于非变性PAGE的试剂。非变性PAGE电泳是研究SSCP-PCR(single-strand conformation polymorphism-PCR、单链PCR片段构象多态性)和凝胶滞阻(Gel Shift)的重要研究手段，因为在非变性PAGE中，DNA的迁移率除跟长短相关外，还跟其构象和结合的蛋白质相关。

产品特点：
1.一站式，用户只需要准备水和样品，十分方便。
2. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙*(代"烯")酰胺。
3. 灵活，高浓度的丙*(代"烯")酰胺溶液可用于配制各种浓度的PAGE胶，分开提供的丙*(代"烯")酰胺和甲叉双丙*(代"烯")酰胺可用于配制各种交联度的PAGE胶。
4. PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。

产品组成：

成分	规格	保存
丙*(代"烯")酰胺	60g	室温
甲叉双丙*(代"烯")酰胺	2g	室温
TEMED	1.5ml	4℃，避光
过硫*(代"酸")铵(干粉)	1g	室温
非变性PAGE上样液，2×	1ml	4℃
10×TBE(BTN90313)	250ml	室温
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：
用于SSCP-PCR分析的非变性PAGE电泳(其他应用请相应修改参数)

一、PAGE浓度的选择：使用浓度为5-12%的丙*(代"烯")酰胺胶，因为SSCP-PCR的扩增长度一般在150-200bp之间，而5%的PAGE的有效分辨范围为80-500bp、8%的PAGE的有效分辨范围为60-400bp、12%的PAGE的有效分辨范围为40-200bp。

二、PAGE交联度的选择：交联度越低，孔径越大，对DNA分子构象的变化越灵敏，SSCP分辨率越高，但过低则胶太软，不好进行电泳后的后续操作，所以一般选择1-2%的交联度(即丙*(代"烯")酰胺：甲叉双丙*(代"烯")酰胺在49:1到48:2之间)。

三、体积的选择：SSCP-PCR检测需要长约30-40cm的测序胶板，可以结合梳子的厚度，计算胶的体积。
操作：
1. 配制PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫*(代"酸")铵)：按每0.1克过硫*(代"酸")铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫*(代"酸")铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜配制适当交联度29:1的30%的丙*(代"烯")酰胺-甲叉双丙*(代"烯")酰胺溶液(AB溶液，下同)：在本产品提供的装有60 g丙*(代"烯")酰胺干粉的塑料瓶中加入146mL自备的去离子水和全部的甲叉双丙*(代"烯")酰胺，充分摇晃直到溶解(约需10-20分钟)，即得到30%的AB(29:1)溶液。此溶液在一个月内用完，必须4℃避光保存。
C：配SSCP PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、30% AB溶液溶液和10×TBE缓冲液。丙*(代"烯")酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(单位：ml)			总体积(ml)
	去离子水	30%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	73.4	16.6	10.0	100
6%	70.0	20.0	10.0	100
7%	66.7	23.3	10.0	100
8%	63.3	26.7	10.0	100
9%	60.0	30.0	10.0	100
10%	56.7	33.3	10.0	100
11%	53.3	36.7	10.0	100
12%	50.0	40.0	10.0	100

注：有大量文献报道PAGE胶中加入5%-10%的甘油能提高某些位点的分辨率。如果选择加入10%的甘油，则减少去离子水的用量10mL，同时加入10mL甘油。
D：摇晃混匀。能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能YZ丙*(代"烯")酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温YZ聚合反应)。
H: 拔出梳子，用1×TEB液冲洗加样孔。
I: 放4℃冰箱预冷30分钟-12小时。为了防止胶收缩，顶部加少量1×TBE缓冲液。预冷的胶有利于保持单链DNA的构型。
2. 将预冷的凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液。
3. 取3-5μl SSCP-PCR样品，加入等体积2×非变性PAGE上样液，85℃处理5分钟后冰浴。用前短暂离心后取2μl上样。
4.连接电源线，打开电源开关。如果PAGE中不含甘油，则使用25W的功率，电泳5-7小时(对3—40cm长的PAGE胶而言)。如果使用含甘油的PAGE，则使用8W的功率，电泳16-18小时。由于温度变化过大会改变DNA构型，所以电泳时能保持恒温。对不含甘油的PAGE，恒温在4℃、对含甘油的PAGE，恒温在25℃。
5. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。

疑难解答：
一、为何SSCP-PCR带型有复合条带？
原因之一：可能是残留的PCR引物跟单链的DNA结合形成迁移率不同的条带。解决方法是稀释PCR或电泳前将PCR产物进行纯化。
原因之二：可能是PCR产物用量过高，彼此复性。解决办法是将PCR产物稀释后4-8倍后使用。
二、如何提高电泳分辨率？
可以在配胶时加入甘油(终浓度为5%-10%)，因为甘油是弱变性剂，能部分展开DNA折叠结构，增加表面积，增加电泳时位移差异。但加入甘油后粘性变大，电泳速度变慢，因此只适合室温电泳使用，不要4℃电泳。如果条件允许，同时做加甘油和不加甘油的电泳实验。


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