Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒 产品描述
Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是：细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。
经上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋弱蓝色荧光。
本试剂盒染色快速方便，可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可达105-106个。
产品组分
组分编号
组分名称
40744ES60（100T）
Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒 保存方法
40744-A
Hoechst 33342 染色液 Hoechst 33342 Stain Solution
500 μl
4℃或-20℃避光保存
40744-B
PI 染色液 PI Stain Solution
500 μl
4℃或-20℃避光保存
40744-C
细胞染色缓冲液 Cell Stain Buffer
100 ml
4℃或-20℃保存
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。
4℃保存，有效期6个月。-20℃保存，有效期12个月，建议分装避免反复冻融。
注意事项
1) Hoechst 33342、PI对人体有害，请注意适当防护；
2) Hoechst 33342、PI需避光，整个实验过程尽量避光操作；
3) 荧光染料均存在淬灭情况，建议染色后需尽快检测；
4) Hoechst 33342 与细胞孵育时间不宜过长，一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。
5) 如果用于组织样品检测，则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。
6) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒 操作步骤
1. 样品准备
贴壁细胞：小心吸除培养液至一个无菌离心管内备用。胰酶消化细胞，加入上述培养液，吹打下所有贴壁细胞，并轻轻吹散细胞，收集至离心管内。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50µl培养液，以免吸到细胞。加入约1ml预冷PBS（Yeasen, 货号：60145ES76）， 重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50µl PBS，以免吸到细胞。轻弹离心管底适当分散细胞，避免细胞成团。
悬浮细胞：4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50µl培养液，尽量避免吸到细胞。加入约1ml预冷PBS， 重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀到管底。小心吸除上清，可留约50µl PBS，以免吸到细胞。轻弹离心管底适当分散细胞，避免细胞成团。
2. 重悬细胞：取上述收集好的105-106个细胞，加入0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬细胞。
3. 细胞染色：
3.1 一步法染色
1） 加入5µl Hoechst 33342染色液。
2）加入5µl PI染色液。
3） 轻轻混匀，冰浴或4℃孵育20-30min。【注：尽快进行后续荧光检测】
3.2 两步法染色：
1）加入5µl Hoechst 33342染色液，置于37℃孵育5-15min；
2）置于冰水浴中冷却后，4℃1000g离心3-5min，吸除上层染色液；
3）加入0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬细胞沉淀；
4）加入5µl PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育5-15min。【注：尽快进行后续荧光检测】
4. 检测与分析
4.1 流式细胞仪检测：Hoechst 33342用氪离子激光激发紫外光，与 DNA结合后其ZD激发波长为352nm，发射波长为400- 500nm（ZD激发波长461nm），产生蓝色荧光；PI用氩离子激光激发荧光，与DNA结合后可用激发波长488nm（ZD激发波长535nm），发射波长大于575nm（ZD激发波长617nm），产生红色荧光，分析蓝色荧光对红色荧光的散点图或地形图。
结果判断：在蓝色荧光对红色荧光的散点图上，可将细胞分为三个群：
正常细胞：弱蓝色荧光＋弱红色荧光【Hoechst 33342+/PI+】；
凋亡细胞：强蓝色荧光＋弱红色荧光【Hoechst 33342++/PI+】；
坏死细胞：弱蓝色荧光＋强红色荧光【Hoechst 33342+/PI++】。
4.2 荧光显微镜观察：检测前4℃ 1000g离心3-5min，沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色和蓝色荧光。【注】：对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测，可以不收集细胞，弃培养液，之后用PBS洗涤细胞一次，弃PBS洗涤液。然后直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液、 Hoechst 33342染色液和PI染色液冰浴或4℃染色20-30min。染色后PBS洗涤一次，然后在荧光显微镜下观察。Hoechst 33342用氪离子激光激发紫外光，与 DNA结合后其ZD激发波长为352nm，发射波长为400-500nm（ZD激发波长461nm），产生蓝色荧光；PI用氩离子激光激发荧光，与DNA结合后可用激发波长488nm（ZD激发波长535nm），发射波长大于575nm（ZD激发波长617nm），产生红色荧光。
Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒 yb1261 MN-vsc 小鼠腹脊髓神经元 Mouse Neurons-ventral spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1262 MN-dsc] 小鼠背脊髓神经元 Mouse Neurons-dorsal spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1263 MN-vsc 小鼠腹脊髓神经元 Mouse Neurons-ventral spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1264 MSC 小鼠雪旺细胞 Mouse Schwann Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1265 MA 小鼠星形胶质细胞 Mouse Astrocytes 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1266 MA-c 小鼠小脑星形胶质细胞 Mouse Astrocytes-cerebellar 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1267 MA-h 小鼠海马趾星形胶质细胞 Mouse Astrocytes-hippocampal 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1268 MA-sc 小鼠脊髓星形胶质细胞 Mouse Astrocytes-spinal cord 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1269 MM 小鼠小胶质细胞 Mouse Microglia 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1270 MMa-bm 小鼠巨噬细胞 Mouse Macrophage 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1271 MLF 小鼠淋巴成纤维细胞 Mouse Lymphatic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1272 MSGF 小鼠唾腺成纤维细胞 Mouse Salivary Gland Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1273 MRTEpiC 小鼠肾小管上皮细胞 Mouse Renal Tubular Epithelial Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1274 MCM 小鼠心肌细胞 Mouse Cardiac Myocytes 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1275 MCF 小鼠心脏成纤维细胞 Mouse Cardiac Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1276 MMSC-bm 小鼠间充质干细胞 Mouse Mesenchymal Stem Cells-bone marrow 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1277 MEF-mt 小鼠胚胎成纤维细胞 Mouse Embryonic Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1278 ATCC
yb1279 大鼠细胞系统 ATCC
yb1280 RPC 大鼠垂体细胞 Rat Pituitary Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1281 RMC 大鼠脑膜细胞 Rat Meningeal Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1282 RN-r 大鼠脑脊神经元 Rat Neurons-raphe 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1283 RN-c 大鼠皮质神经元 Rat Neurons-cortical 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1284 RGC 大鼠颗粒细胞 Rat Granule Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1285 RN-h 大鼠海马趾神经元 Rat Neurons-hippocampal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1286 RN-sn 大鼠黑质神经元 Rat Neurons-substantia nigra 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1287 RN-s 大鼠纹状体神经元 Rat Neurons-striatal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1288 RN-vsc 大鼠腹脊髓神经元 Rat Neurons-ventral spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1289 RN-dsc 大鼠背脊髓神经元 Rat Neurons-dorsal spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1290 RN-sc 大鼠背脊髓神经元 Rat Neurons-dorsal spinal cord 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1291 ROPC 大鼠少突胶质前体细胞 Rat Oligodendrocyte Precursor Cells 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1292 ROPC-f 大鼠少突胶质前体细胞-新鲜 Rat Oligodendrocyte Precursor Cells-fresh 1 x 10^6 cells/tube ATCC
yb1293 RSC 大鼠雪旺细胞 Rat Schwann Cells 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1294 RPNF 大鼠神经束膜细胞 Rat Perineural Fibroblasts 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1295 RA 大鼠星形胶质细胞 Rat Astrocytes 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1296 RA-c 大鼠小脑星形胶质细胞 Rat Astrocytes-cerebellar 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1297 RA-h 大鼠海马趾星形胶质细胞 Rat Astrocytes-hippocampal 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1298 RM 大鼠小胶质细胞 Rat Microglia 5 x 10^5 cells/vial ATCC
yb1299 RMa-bm 大鼠巨噬细胞 Rat Macrophage 1 x 10^6 cells/vial ATCC
yb1300 REK-n 大鼠表皮角质细胞-新生 Rat Epidermal Keratinocytes-neonate 5 x 10^5 cells/vial ATCC
