产品库
登录
首页 找仪器 社区 百科 新品 供应商 品牌 应用 资料 仪企号 展会 标准 求购 招中标

Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒

产品信息
  • 产品名称产品信息
    产品名称           产品编号 规格 储存 价格（元）
    Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒  40744ES60 100T -20 ºC～+4℃ 219.00
    产品描述
    Hoechst 33342/PI 双染试剂盒（Hoechst 33342/PI Double Stain Kit）采用Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）双染的方法以区分凋亡细胞和坏死细胞的试剂盒。其检测原理是：细胞核荧光染料Hoechst 33342可以穿透细胞膜，嵌入双链DNA后释放蓝色荧光。对于正常细胞，其可少许进入细胞膜使其染上低蓝色。而凋亡细胞由于细胞膜通透性增强，从而使得进入凋亡细胞内的Hoechst 33342明显多于正常细胞，荧光强度比正常细胞要高。另外，细胞发生凋亡时染色质会固缩，从而使得染料能更有效和聚集的结合于DNA，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受损而不能有效的将Hoechst 33342排除到细胞外使其在细胞内的积累增加，这些特征都使得凋亡细胞经染色后荧光会比正常细胞明显增强。但细胞核荧光染料PI不能穿透细胞膜完整的正常细胞或凋亡细胞，即活细胞对PI染料拒染。而对于坏死细胞，其细胞膜的完整性在早期即已丧失，可被PI染色。
    经上述两种染料双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时，正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光，凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光，坏死细胞为强红色荧光＋弱蓝色荧光。
    本试剂盒染色快速方便，可用一步法或者两步法进行染色。使用流式细胞仪检测时，无需稀释等配制过程，也无需再准备其它任何溶液。本试剂盒足够检测100个样品，每个样品的细胞数量可达105-106个。
    产品组分
    组分编号 组分名称 40744ES60（100T）  保存方法
    40744-A Hoechst 33342 染色液 Hoechst 33342 Stain Solution 500 μl 4℃或-20℃避光保存
    40744-B PI 染色液 PI Stain Solution 500 μl 4℃或-20℃避光保存
    40744-C 细胞染色缓冲液 Cell Stain Buffer 100 ml 4℃或-20℃保存
    运输与保存方法
    冰袋（wet ice）运输。
    4℃保存，有效期6个月。-20℃保存，有效期12个月，建议分装避免反复冻融。
    注意事项
    1. Hoechst 33342、PI对人体有害，请注意适当防护；
    2. Hoechst 33342、PI需避光，整个实验过程尽量避光操作；
    3. 荧光染料均存在淬灭情况，建议染色后需尽快检测；
    4. Hoechst 33342 与细胞孵育时间不宜过长，一般控制在20min以内。太长容易引起该染料的发射光谱由蓝光向红光迁移，导致红色荧光和蓝色荧光比例改变。
    5. 如果用于组织样品检测，则必须把组织消化制备成单细胞悬浮液后才可以进行检测。
    6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
    操作步骤
    1. 样品准备
    贴壁细胞：小心吸除培养液至一个无菌离心管内备用。胰酶消化细胞，加入上述培养液，吹打下所有贴壁细胞，并轻轻吹散细胞，收集至离心管内。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50µl培养液，以免吸到细胞。加入约1ml预冷PBS（Yeasen, 货号：60145ES76）， 重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50µl PBS，以免吸到细胞。轻弹离心管底适当分散细胞，避免细胞成团。
    悬浮细胞：4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀至管底。小心吸除上清，可留约50µl培养液，尽量避免吸到细胞。加入约1ml预冷PBS， 重悬细胞，并转移至1.5ml无菌离心管。4℃，1000g 离心3-5min，使细胞沉淀到管底。小心吸除上清，可留约50µl PBS，以免吸到细胞。轻弹离心管底适当分散细胞，避免细胞成团。
    1. 重悬细胞：取上述收集好的105-106个细胞，加入0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬细胞。
    2. 细胞染色：
    3. 一步法染色
    4. ） 加入5µl Hoechst 33342染色液。
      2）      加入5µl PI染色液。
      3） 轻轻混匀，冰浴或4℃孵育20-30min。【注：尽快进行后续荧光检测】
    5. 两步法染色：
    6. ）加入5µl Hoechst 33342染色液，置于37℃孵育5-15min；
    7. ）置于冰水浴中冷却后，4℃1000g离心3-5min，吸除上层染色液；
    8. ）加入0.8-1ml细胞染色缓冲液重悬细胞沉淀；
    9. ）加入5µl PI染色液，置于冰浴或4℃，孵育5-15min。【注：尽快进行后续荧光检测】
    10. 检测与分析
    4.1  流式细胞仪检测：Hoechst 33342用氪离子激光激发紫外光，与 DNA结合后其ZD激发波长为352nm，发射波长为400- 500nm（ZD激发波长461nm），产生蓝色荧光；PI用氩离子激光激发荧光，与DNA结合后可用激发波长488nm（ZD激发波长535nm），发射波长大于575nm（ZD激发波长617nm），产生红色荧光，分析蓝色荧光对红色荧光的散点图或地形图。
    结果判断：在蓝色荧光对红色荧光的散点图上，可将细胞分为三个群：
    正常细胞：弱蓝色荧光＋弱红色荧光【Hoechst 33342+/PI+】；
    凋亡细胞：强蓝色荧光＋弱红色荧光【Hoechst 33342++/PI+】；
    坏死细胞：弱蓝色荧光＋强红色荧光【Hoechst 33342+/PI++】。
    • 荧光显微镜观察：检测前4℃ 1000g离心3-5min，沉淀细胞，用PBS洗涤一次，再涂片观察红色和蓝色荧光。【注】：对于贴壁细胞使用荧光显微镜检测，可以不收集细胞，弃培养液，之后用PBS洗涤细胞一次，弃PBS洗涤液。然后直接依次按照上述比例加入细胞染色缓冲液、 Hoechst 33342染色液和PI染色液冰浴或4℃染色20-30min。染色后PBS洗涤一次，然后在荧光显微镜下观察。Hoechst 33342用氪离子激光激发紫外光，与 DNA结合后其ZD激发波长为352nm，发射波长为400-500nm（ZD激发波长461nm），产生蓝色荧光；PI用氩离子激光激发荧光，与DNA结合后可用激发波长488nm（ZD激发波长535nm），发射波长大于575nm（ZD激发波长617nm），产生红色荧光。
    相关产品
    产品编号 产品名称 规格 价格（元）
    60145ES76 1×PBS, pH 7.4, Cell Culture Grade 500ml 45.00
    40710ES03 Propidium iodide Stain Solution（1mg/ml） 1ml 265.00
    40730ES03 Hoechst 33258 Stain Solution（1mg/ml） 1ml 280.00
    40732ES03 Hoechst 33342 Stain Solution (1mg/ml) 1ml 295.00
    40722ES03 7-AAD 1mg 998.00
    40747ES76 Calcein-AM/PI Double Stain Kit 500T 659.00
    40301ES50 Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit 50T 298.00
    40302ES20 Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 20T 480.00
    40305ES20 Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit 20T 518.00
     
    温馨提示：不可用于临床ZL。
    • 信息声明：本产品供应信息由仪器网为您整合，供应商为（上海翊圣生物科技有限公司），内容包括 （Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒 ）的品牌、型号、技术参数、详细介绍等；如果您想了解更多关于 （Hoechst 33342/PI Double Stain Kit Hoechst 33342/PI 双染试剂盒 ）的信息，请直接联系供应商，给供应商留言！
    供应商产品推荐
      您可能感兴趣的产品