Propidium Iodide Staining Solution（1mg/ml） 碘化丙啶染液（1mg/ml）产品描述
碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。水溶液中PI的ZD激发/发射波长是493/636nm。一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，ZD激发波长向红色波段迁移~30-40nm，ZD发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其ZD激发/发射波长变为535/617nm。PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。
PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。PI的单独染色也可以进行细胞周期的检测。
本品是溶于水的PI储存液，浓度为1mg/ml，只需用合适的缓冲液稀释到工作液即可。
产品性质
英文同义名（English synonym）
2,7-Diamino-9-phenyl-10 (diethylaminopropyl)-phenanthridium iodide methiodide.
CAS号（CAS NO.）
25535-16-4
分子式（Formula）
C27H34I2N4
分子量（Molecular Weight）
668.4
纯度（Purity）
≥95% by HPLC
溶解性（Solubility）
溶于水（1mg/ml）
荧光光谱 （Fluorescence Spectral）
水溶液，PI的Ex/Em= 493/636nm；PI-核酸的Ex/Em= 535/617nm；荧光可用氙气灯，泵弧灯或者488nm氩离子激光激发。通常情况下，用流式细胞仪的FL2通道检测。
结构式（Structure）
运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。4 ºC避光保存，至少6个月稳定。
Propidium Iodide Staining Solution（1mg/ml） 碘化丙啶染液（1mg/ml）使用方法
1. 贴壁细胞复染步骤（荧光显微镜检测）
1） 样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。
2） RNase酶处理：若样本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；b，将本品置于含有100µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；c，用2×SSC溶液清洗样本3次，每次1min。
3） 复染：a，于2X SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；b，直接用2×SSC稀释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5min。c，2×SSC清洗几次，流尽多余的缓冲液后，加入抗淬灭剂封片（比如Yeasen，货号：36308ES08）。d，选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。
2. 悬浮细胞复染步骤（流式细胞仪检测）
1） 样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。或者使用如下的步骤：
a， 收集一定量的细胞，密度约 2 × 105 ~1 × 106。离心收集细胞，吸掉上清液，用手轻弹管壁就剩下
的液体重悬细胞。之后加入1ml常温存放的PBS；
b，将所有的重悬细胞转移到4ml于-20ºC预冷的无水乙醇，在高速涡旋混匀的同时一边用枪缓慢的添
加细胞悬液到乙醇内。于-20ºC乙醇中固定5-15min。
c， 离心收集细胞，除去乙醇。用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入5ml室温的PBS。允许细胞水化15min；
2） 复染
a， 用染色液（100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2 , 0.5 mM MgCl2 , 0.1% Nonidet® P-40）稀
释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:500，得到3 µM的PI工作液。1ml的PI染色液足够用于每个细胞样本的检测。注：工作液的使用浓度可以根据自身实验体系调整，也可以直接使用PBS，HBSS等缓冲液直接稀释PI储存液到需要的浓度。
b，样本制备的ZH一步后离心收集细胞，去除上清，用手轻弹管壁以弹松细胞后，加入1ml的PI染
色工作液。室温孵育15min后，流式细胞仪进行细胞分析。若用流式显微镜观察，则需要离心样本，去除上清并重悬细胞在新鲜的缓冲液中。吸取1滴悬液到载玻片上，盖上盖玻片后观察。
3. 染色质FISH复染步骤
1） 样本准备：根据标准步骤制备样本。复染之前的ZH一步用去离子水清洗样本以去除玻片上残留的缓冲盐。室温晾干。此步骤有助于减少非特异性的背景染色。
2） 复染
a，工作液的配制：用PBS缓冲液直接稀释1 mg/ml（1.5 mM）的PI储存液1:1000，得到1.5 µM的
PI染色工作液。滴加300µL的工作液直接到样本。有必要的话，工作液内加入新鲜制备的RNase A（终浓度：10 µg/mL）。可使用塑料盖玻片均匀分布染液在载玻片上。室温避光条件下孵育样本30 min；如果加入RNase则37ºC孵育。
b. 去除盖玻片，用PBS或去离子水清洗以除去没有结合的染料；
c. 用吸水纸巾围绕着样本周围吸取残留液体，盖上玻璃盖玻片后用石蜡或者指甲油封住盖玻片边缘。也可用抗荧光淬灭剂进行封片。
d. 选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。
注意事项
1) 碘化丙啶（PI）是已知的诱变剂，因此PI溶液在丢弃之前需要先经过活性炭处理。
2) 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Propidium Iodide Staining Solution（1mg/ml） 碘化丙啶染液（1mg/ml）相关产品
ing:0pt�I/pp/>�:style=font-size:9.0pt;font-family:宋体; mso-bidi-font-family:宋体;color:black;mso-font-kerning:0pt>） 加入2mL 细胞培养液，培养液中可以含有血清和酚红。
6） 荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。
5. 对于纯化的线粒体
1） 把配制好的JC-1 染色工作液再用JC-1 染色缓冲液（1×）稀释5 倍。
2） 0.9mL 5 倍稀释的JC-1 染色工作液中加入0.1mL 总蛋白量为10～100μg 纯化的线粒体。
3） 用荧光分光光度计或荧光酶标仪检测：混匀后直接用荧光分光光度计进行时间扫描（time scan），激发波长为485nm，发射波长为590nm。如果使用荧光酶标仪，激发波长不能设置为485nm 时，可以在475～520nm 范围内设置激发波长。另外，也可以参考下面步骤6 中的波长设置进行荧光检测。
4） 用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察：方法同下面的步骤6。
6. 荧光观测和结果分析
检测 JC-1 单体时可以把激发光设置为490nm，发射光设置为530nm；
检测JC-1 聚合物时，可以把激发光设置为525nm，发射光设置为590nm。
注意：此处测定荧光时不必把激发光和发射光设置在ZD激发波长和ZD发射波长。如使用荧光显微镜观察，检测JC-1聚合物时可使用常来检测碘化丙啶或者Cy3用的标准带通滤波器。检测JC-1单体可使用常来检测绿色荧光化合物如FITC的标准带通滤波器。出现绿色荧光说明线粒体膜电位下降，并且该细胞很可能处于细胞凋亡早期。出现红色荧光说明线粒体膜电位比较正常，细胞的状态也比较正常。
也可以使用双带带通滤波器如FITC/罗丹明， FITC/Texas Red来同时检测两种荧光探针。
另外，由于红色的JC-1信号淬灭比绿色快，所以用标准带通滤波器检测时先检测红色荧光并拍照。
注意事项
1） JC-1（200×）在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20～25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
2） 必须先把JC-1（200×）用试剂盒提供的超纯水充分溶解混匀后，才可以加入JC-1染色缓冲液（5×）。不可先配制JC-1染色缓冲液（1×）再加入JC-1（200×），这样JC-1会很难充分溶解，会严重影响后续的检测。
3） 装载完JC-1后用JC-1染色缓冲液（1×）洗涤时，使JC-1染色缓冲液（1×）保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。
4） JC-1探针装载完并洗涤后尽量在30分钟内完成后续检测。在检测前需冰浴保存。
5） 请勿把JC-1染色缓冲液（5×）全部配制成JC-1染色缓冲液（1×），本试剂盒使用过程中需直接使用JC-1染色缓冲液（5×）。
6） 如果发现JC-1染色缓冲液（5×）中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。
7） CCCP为线粒体电子传递链YZ剂，有毒，请注意小心防护。
8） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
Propidium Iodide Staining Solution（1mg/ml） 碘化丙啶染液（1mg/ml）yb-2235. SNU-182(人肝癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-8024. PLC/PRF/5（人肝癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-169. WERI-Rb-1（人视网膜母细胞瘤）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1572. PA-1(人卵巢畸胎瘤细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-126. Hs 578T（人乳腺成纤维细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-125. Hs 578Bst（人乳腺成纤维细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-7762. TE 354.T(人皮肤基底细胞癌）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-7761. TE 353.Sk(人正常皮肤细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-228. SW480 [SW-480]（人结肠癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-227. SW620 [SW-620]（人结肠腺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-5803. NCI-H1299（人肺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1721. PC-12（大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1651. COS-7（非洲青猴肾细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-11731. TOV-112D（人上皮性卵巢癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-171. MRC-5(人正常胚肺成纤维细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-5875. NCI-H1563 [H1563]（人胚肺细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-5928. NCI-H2170 [H2170]（人肺鳞状细胞癌）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-211. Hs888Lu（人肺成纤维细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-2177. SW 1271 [SW-1271; SW1271]（人肺腺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-8065. Hep G2（人肝癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-2061. SJCRH30 [RC13; RMS 13; SJRH30]（人横纹肌肉癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1772. C2C12（人肌肉成纤维细胞瘤）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-1447. G-7（小鼠骨骼肌肌肉母瘤细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-2174. Sol8（小鼠骨骼肌肌肉母细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-198. BLO-11（小鼠骨骼成纤维细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-197. NOR-10（小鼠骨骼肌成纤维细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-178. NCI-H596 [H596]（人肺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-182. NCI-H520 [H520]（人肺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-5889. NCI-H1703 [H1703]（人肺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-5826. NCI-H226 [H226]（人肺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-58. SK-MES-1（人肺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-5900. NCI-H1869 [H1869]（人肺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
yb-59. SW 900 [SW-900; SW900]（人肺癌细胞）. 品PaiATCC 规格25毫升/株. 货期1-2周
