特别提示:包括双显色抗山羊IgG免疫组化试剂盒CY3和过氧化物酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床YL及其他非科研用途!
产品名称:双显色抗山羊IgG免疫组化试剂盒CY3和过氧化物酶
英文名称:Double chromogenic Immunofluorescence kit for goat IgG(Cy3&POD)
产品货号:ZN1855
产品规格:1ml|2ml|5ml
本试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的。链霉亲和素同亲和素一样,对生物素分子有极高的亲和力,是一般抗原抗体亲和力的一百万倍,兼具高敏感性,低背景和操作简便的优点。CY3 比传统上的荧光更具有亲水性,因而不会因疏水性而引起非特异性吸附或聚合,从而背景更低。而且其敏感性和稳定性都更好。CY3 在 554nm 激化,在 568-574nm 发射荧光,呈鲜红色。免疫组化双显色试剂盒采用 CY3+过氧化物酶 POD 标记的链酶亲和素(SABC-CY3+POD),用户根据实验需要,可在同一张切片上用两套显示系统观察。
试剂盒组成:
组分 | 规格 | 正常兔血清封闭液(稀释比1:10) | 1ml/2ml/5ml | 生物素化兔抗山羊IgG(参考效价1:100) | 0.1ml/0.2ml/0.5ml | SABC-Cy3(参考效价1:100) | 0.1ml/0.2ml/0.5ml | SABC-POD(参考效价1:100) | 0.1ml/0.2ml/0.5ml |
另附有四个滴瓶可供稀释试剂用。
保存条件:4℃可保存一年,应避免冷冻。
石蜡片染色步骤:
1. 石蜡切片,常规脱蜡至水。
2. 3%H2O2去离子水室温孵育5-10分钟,以消除内源性过氧化物酶活性,PBS冲洗,5分钟×3次。
3. 根据需要选择抗原修FF式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4. 封闭。滴加用稀释后的正常山羊血清封闭液(稀释比 1:10),37℃孵育30分钟,甩干,勿洗。
5. 滴加一抗(山羊IgG),37℃孵育1-2小时或4℃过夜。PBS冲洗,5分钟×3次。
6. 滴加生物素化兔抗山羊IgG,37℃孵育30 分钟。PBS冲洗,5分钟×3次。
7. 滴加 SABC-Cy3(参考效价1:100)或SABC-POD(参考效价1:100),37℃孵育30分钟。PBS冲洗,5分钟×3次。
8. 显色液显色,镜下控制反应时间。显色剂可选DAB(ZN1968)。自来水充分冲洗。
9. 根据需要进行苏木素(ZN1971)复染,染色时间为0.5-2分钟。选用中性树胶,水溶性封片剂(ZN2946)或抗荧光衰减封片剂(ZN1974)封片。
10. 结果观察。荧光显微镜下有黄绿色颗粒者为阳性染色。普通光学显微镜下有棕黄色颗粒者为阳性染色。
建议:
1. 热修复可选用枸橼酸盐缓冲液(ZN1955)、EDTA抗原修复液(ZN1951)、PBS缓冲液、TBS缓冲液(ZN1953)等作为抗原修复液。
2. 酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、抗原修复液Ⅰ(ZN1954,与热修复配合使用)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。
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名称:Western转膜液
货号:YT063
规格:1L|10×1L
本品可以用于Western时湿法电转膜。本Western转膜液是一种安全的转膜液,没有使用剧毒的甲醇,也没有使用其它的有毒试剂。本Western转膜液配制便捷,无需调节pH值。本Western转膜液可以回收,回收后可以再使用2-3次。
注意事项:
1. 如果转膜液颜色变成浅棕色或黄褐色,应该丢弃。
2. 建议使用分析纯级别的乙醇或更高纯度的乙醇。
储存条件:室温,有效期两年。
名称:甘油明胶封片液(Kaiser封片液)
货号:YT095
规格:10ml
本品是一种参考经典的Kaiser方法配制的水性封片液,但经过改良,不再含剧毒苯酚,可以用于常规的各种切片、涂片等的封片。本甘油明胶封片液中的主要有效成分为明胶和甘油。按照每个样品封片需要50微升计算,足够用于200个样品的封片。
储存条件:4℃,有效期一年。
名称:Bradford蛋白浓度测定试剂盒
货号:ZN1872
规格:1盒
产品规格:
Bradford 染色液 100ml
BSA 标准品 20ml(2mg/ml)
产品描述:应用试管法可以测量100管,微孔板法可以测量400孔
产品保存:4℃保存,一年有效。
产品说明:Bradford 蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据 Bradford 染液(考马斯亮蓝 G-250 染料)与蛋白结合,使染料的zuì大吸收峰从 A456变为A595,且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值,推算蛋白浓度,实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高,比 Lowry 法大约高四倍,zuì低蛋白检测量可达 1μg。测定速度快、简单,仅需一种试剂即可,且不受大多数样品中化学试剂的影响。
注意事项:
1.各取样操作应准确无误。
2.在100~1500μg/ml的浓度范围线性zuì佳。
3.加入样品后的试剂,混合均匀后,静置反应,测量过程中切不要再次剧烈晃动。
4.Bradford 染色液使用前,应充分混匀。同时,酶标仪需预热 20min。
5.Bradford 染色液需恢复到室温再使用,有利于提高检测的灵敏度。
6.每次试验都必须建立标准曲线。另外,为了得到更精确的结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔。
7.Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好,比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响,如,SDS需低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20/ 60/80低于0.015%等。(详情见附录)对于含去垢剂的样品,建议使用BCA蛋白定量检测试剂盒。
使用说明:
一、配制 BSA 标准品
标准品稀释液为蛋白样品的溶解液,原则上蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。
但也可用 0.9%的NaCl或1×PBS 进行稀释。
二、检测方法
A.试管法检测(线性范围:100-1500μg/ml)
1.各取20μl不同浓度标准品和待测样品加入到反应管中;
2.加入1ml Bradford 染色液,混匀。室温孵育10min。
3.分光光度计上测定 595nm 处的吸光度,用装满水的比色皿对仪器校零。之后测定所有样本浓度。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即zuì终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml;Y-zuì终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
B.标准微孔板检测(线性范围:100-1500μg/ml)
1.各取 5μl 各浓度标准品和待测样品加入到微孔板中;
2.每孔加入 250μl Bradford 染色液,振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板,室温孵育10min。
3.酶标仪上测定595nm处的吸光度。或者其他575~615nm波长范围内的吸光度,但是相对于595nm,吸光度会存在~10%的损失。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即zuì终的读数),绘制标准曲线(X-蛋白浓度μg/ml;Y-zuì终的OD595nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
注意:由于酶标板的光径比比色皿短,经酶标板检测得到的OD595nm会低于比色皿检测所得,因此可能降低本法的检测下限。要得到更高的OD595nm,可使用 7-10μl 标准品/待检样本,和 250μlBradford 染色液来进行检测。

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