QN1160 DAB法显色试剂盒(山羊IgG)

特别提示：包括DAB法显色试剂盒(山羊IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：DAB法显色试剂盒(山羊IgG)

英文名称：Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

产品货号：QN1160

产品规格：1盒



本试剂盒主要用于western blotting的DAB显色，含有抗山羊IgG酶标二抗。



SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。



试剂盒组分：

封闭试剂————————————30g

10倍浓缩抗体稀释液———————50ml

酶标二抗————————————0.5ml，效价1:500～3000

20倍DAB浓缩显色液-———————5mlA+5mlB。



常规电泳转膜后:

1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。

2) 按5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。

3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml 双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。

4) 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。

5) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。

6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按10ml 抗体稀释液加入10ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。

7) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次10min。

8) 配制DAB 显色：根据用量，取TBS-T 4ml，加入DAB 显色液A、DAB 显色液B 各200ul，混匀，加在膜正面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。



注意事项：

1. 请根据一抗来源选择试剂盒。

2. western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。

3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长zuì终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。

4. 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程， 如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。

5. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml 的双蒸水溶解，用盐酸调PH 到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）



储存条件：-20℃避光，有效期一年。



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名称：溴酚蓝

货号：SNM449

规格：10g



名称：冰冻切片快速抗原修复液(5X)

货号：KFS006

规格：100ml

冻切片快速抗原修复液是一种特别适合用于冰冻切片的快速抗原修复液，只需室温孵育5 分钟即可完成对冰冻切片样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。



细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。



本抗原修复液含有了广泛使用的SDS 等抗原修复试剂等，pH 值约为7.4，可以快速有效地去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。



通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果，但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时，可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看，无论冰冻切片还是细胞爬片等，只要是用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定的样品，进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联，充分暴露抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。



本产品特别适合用于冰冻切片的抗原修复并用于后续的免疫染色。



一个包装的本产品可以配制成500 毫升抗原修复液(1X)。按照每个片子需要10 毫升抗原修复液(1X)计算，一个包装的本产品可以用于50 个样品。按照每个片子需要5 毫升抗原修复液(1X)计算，则一个包装的本产品可以用于100 个样品。



名称：ASPP1蛋白检测试剂盒

货号：KFS226

规格：50T

本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶YZ剂及磷酸酶YZ剂的裂解缓冲液LysisBuffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便GX。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究（本试剂盒包含兔抗ASPP1抗体），但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的YZ剂。



名称：Bradford蛋白浓度测定试剂盒

货号：SY0299

规格：500T|2500T

Bradford蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一。它是根据Bradford染液（考马斯亮蓝G-250染料）与蛋白结合，使染料的zuì大吸收峰从A456变为A595，且测定的吸光值与蛋白浓度成正比关系的原理设计的。本法通过吸光值，推算蛋白浓度，实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高，比Lowry法大约高四倍，zuì低蛋白检测量可达1μg。测定速度快、简单，仅需一种试剂即可，且不受大多数样品中化学试剂的影响。



我司提供二种规格的Bradford蛋白浓度检测试剂盒，比色皿法分别可做125次和625次。酶标法分别可做500次和2500次。



注意事项：

1）Bradford染色液使用前，应充分混匀。同时，酶标仪需预热20min。

2）Bradford染色液需恢复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。另，使用前需颠倒几次以充分混匀。

3）由于Bradford染液的颜色反应并不是同递增的蛋白浓度呈线性关系，因此每次试验都必须建立标准曲线。另外，为了得到更精确的结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔。

4）Bradford法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好，比如对还原剂DTT的兼容性高达5mM。但会受到略高浓度的去垢剂影响，如，SDS需低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20/ 60/80低于0.015%等。对于含去垢剂的样品，建议使用BCA增强型蛋白定量检测试剂盒。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。



储存条件：4℃，有效期一年。



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