MT0015 一步法cDNA链合成试剂盒

特别提示：包括一步法cDNA链合成试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：一步法cDNA链合成试剂盒

英文名称：First cDNA Synthesis Kit（with gDNA Remover）

产品货号：MT0015

产品规格：20μl×100次|20μl×2000次



本试剂盒采用稳定GX的反转录预混体系5×RT MasterMix进行RNA的反转录反应，使用时只需加入模板、引物和RNase Free H2O即可，大大简化了操作过程、提高了效率、减少了操作过程中的人为误差。MasterMix中添加了dsDNase（热敏双链特异性核酸酶），该双链特异性核酸酶（又名gDNA Remover）可在反转录的过程中，直接降解去除RNA中残留的基因组DNA污染(可去除100ng基因组DNA)，从而在定量PCR的检测中无需考虑基因组污染的干扰，设计的定量PCR引物也无需进行横跨外显子。该试剂盒尤其适用于定量PCR检测。



该预混体系包含点突变致RNase H活性缺失的反转录酶、dNTP、反应Buffer、gDNA去除试剂和RNaseYZ剂。该试剂盒采用的反转录酶去除了RNase H活性，从而避免反转录过程中降解RNA。同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受55℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应，采用高温反转录可显著打开RNA二级结构，从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，从而提高后续检测的灵敏度。合成的链cDNA可广泛用于2nd Strand的合成、杂交、PCR扩增、Real-Time PCR反应等。



特点：

1．dsDNase有效去除基因组的污染，YZ了因基因组污染引起的非特异性扩增。

2．55℃进行反转录的MLV反转录酶，能更好的转录含有复杂高级结构的RNA模板。

3．GX便捷的反转录预混体系。

4．反转录引物为Random Primer和Oligo dT Primer预混的RT Primer Mix，可更好的合成样品中的各种cDNA。







产品组成：

组分	MT0015-100T	MT0015-2000T
5×RT MasterMix(with dsDNase)	400μl	8ml
20×Oligo dT(25)&Random Primer	100μl	2ml
Rnase-Free H2O	1ml×2	50ml

注：1．本试剂盒可有效反转录mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA。

  2．本试剂盒不可反转录microRNA、病毒DNA/RNA样品。



保存条件：请置于-20℃，可保存2年；避免反复冻融。



使用方法：



1．按以下组分配制反转录反应液

Total RNA or Poly(A) RNA	0.1-2μg
5×RT MasterMix(with dsDNase)	4μl
*20×Oligo dT(25)&Random Primer	1μl
Rnase-Free H2O	Up to 20μl

*注：反转录引物可根据需要改用特异性引物。

2．在PCR仪上按以下条件进行反转录反应:

  37℃   10分钟（去除gDNA）

  55℃   *30～60min（cDNA 合成）

  85℃   10分钟（失活 MLV）

  4℃

*注：采用60min通常可以获得更多的cDNA产物（100％产量），通常30分钟也可以获得足够的cDNA产物（80％产量）。



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