WH0194 pTG-T载体快速克隆试剂盒

特别提示：包括pTG-T载体快速克隆试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床YL及其他非科研用途！

产品名称：pTG-T载体快速克隆试剂盒

英文名称：pTG-T-vector Fast Cloning Kit

产品货号：WH0194

产品规格：20μl|60μl



本试剂盒中的Fast pTG-T载体是一种GX克隆PCR产物的专用载体，经由克隆质粒在XcmI内切酶酶切后得到的带3"T突出末端的线性化载体，通过该方法产生的带有3"T突出末端的线性化载体效率远高于传统酶切加尾法。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在PCR产物的3"端添加一个A，可与Fast pTG-T载体3"端的T互补连接。



试剂盒中配备了新型的Rapid Ligation Mix（目录号：WH0193）为GX的T4 DNA连接酶反应试剂，其中含有连接增强剂、酶稳定剂，可大大缩短连接时间、提高PCR产物的连接和克隆效率。按不同需要配备了DH5α感受态细胞以及对照用超螺旋质粒，方便进行转化。带有插入片段的重组子可根据α互补原理，进行蓝白斑筛选，判断载体中有无外源基因的插入（白色克隆为阳性重组克隆，蓝色的为载体自连的克隆，具体筛选原理参考分子克隆等书籍）。克隆后，可使用通用引物T7、SP6进行鉴定和测序。



产品特点：

·GX快速：5min快速连接，阳性率近。

·灵敏广泛：适合低至0.025pmol浓度片段和长至8 kb片段的GX连接。

·操作便捷：配合使用新型Rapid Ligation Mix，只需加入载体和片段即可进行连接反应。



试剂盒组成：

组分	WH0194-1	WH0194-2
Fast pTG-T-Vector	20μl	60μl
Rapid Ligation Mix（2×)	100μl	100μl×3
Control Insert DNA（688bp)（50ng/μl)	10μl	10μl
DH5α（100μl each)	100μl×10	100μl×30
Compcell Control Plasmid pUC19（0.1ng/μl)	10μl	10μl
ddH2O	1ml	1ml

保存条件：感受态细胞需要严格的在-70℃冻存，保质期6个月，其余的试剂可于-20℃保存1年，避免反复冻融。（载体和连接试剂可以适当的分装成小份，防止反复冻融，以保证质量）。



不同片段使用量：

载体与片段的摩尔比控制在1:3～1:10，请根据凝胶电泳或紫外分光光度计检测后的浓度和片段长度来计算其摩尔比。插入片段用量，可根据以下公式粗略计算：

插入片段用量ng=（3～10)×（插入片段长度/载体长度

)×载体用量ng

连接体系中50ng的载体，不同大小的PCR产物zuì佳加入量举例如下：

PCR产物长度	zuì佳的使用量
700bp	35ng
2000bp	100ng

反应体系：标准体系为10μl体积，5μl的反应体系也能取得很好的效果，试剂用量减半。



载体图谱：



多克隆位点图：