登革热IgM 捕获ELISA法
预定用途：
Panbio登革热IgM 捕获ELISA法是一种定量检测血清中登革热IgM抗体的方法，可以作为临床具有登革热症状病人的临床实验室检测辅助手段。Panbio登革热捕获ELISA法应和其它的登革热血清学方法联合应用。
序言：
登革热，黄病毒属B群黄病毒，广泛存在于热带和亚热带地区。通过蚊子，主要是埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。感染了登革热病毒在临床上可以引起一系列从不明显到致死性的登革出血热症状。典型登革热症状表现为突然发热、激烈头痛、肌痛、关节痛和出疹。还有二相热型、失眠、由于味觉丧失或苦味导致的厌食等也很常见。登革出血热和登革休克综合征经常是伴随二次血清感染出现的严重并发症。
登革热病毒IgM抗体ELISA检测法是一种很有用的方法，尤其是在二次和后继的多次感染中，那时并发症的发生率很高。登革热病人的血清IgM抗体能在发热后3~5天就能检测并通常能持续30~90天，虽然检测水平可能在感染后的8个月都可存在。
原理：
IgM群血清抗体和粘附在微孔测试板聚笨乙烯表面上的抗人IgM抗体相结合。用抗原稀释液把登革热1~4号抗原浓缩液稀释到恰当的工作容量。抗原由昆虫细胞表达系统和一种免疫纯化的单克隆抗体制得而成。在稀释抗原中加入适量的辣根过氧化物酶（HRP）结合单克隆抗体（MAb）形成抗原-MAb复合物。洗去测试板内的残存血清，加入抗原-MAb复合物。孵育后，洗涤微孔板，加入无色底物，四甲基联苯胺/过氧化氢（TMB/H2O2）。底物被酶水解后变成蓝色。加酸终止反应后，TMB变成黄色。颜色的变化表明测试样本中有抗登革热IgM抗体。
提供的材料：
1．抗-人IgM包埋微孔板—（测试板）微孔用抗-人IgM抗体包埋（12＊8个孔）。备用。不用的微孔板立即收好，贮存在有干燥剂的地方。在2-8ºC稳定至失效。2. 登革热1-4号抗原（重组体）— 一个透明有盖的玻璃瓶，150 μL（蓝色）浓缩的登革热病毒抗原1,2,3和4号。没有用过的稀释的抗原一定要扔掉。浓缩的抗原贮存于2~8度直至失效。
3. 洗涤缓冲浓缩液— 一瓶60ml用吐温20和防腐剂（0.1% ProclinTM）20倍浓缩的磷酸盐缓冲盐水pH 7.2-7.6。在低温下可能会形成结晶。为避免这种情况，把它放在37ºC直至变得透明。充分混匀。在1份洗涤缓冲浓缩液加入19份蒸馏水稀释。稀释的缓冲液在2~25ºC可以贮存一个星期。
4. 血清稀释液-两瓶50ml装（粉红色）。备用。三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水pH 7.2-7.6 含防腐剂（0.1% Proclin）和添加剂。在2~8ºC保持稳定直至失效。
5. 抗原稀释液-一瓶50ml装（透明色）。备用。磷酸盐缓冲液含防腐剂（0.1% ProclinTM 和0.005% 庆大霉素）。在2~8ºC保持稳定直至失效。
6. 辣根过氧化物酶共轭单克隆抗体示踪剂-一瓶7ml装（黄色）。备用。辣根过氧化物酶共轭单克隆抗体示踪剂含防腐剂（0.1% Proclin.）和蛋白稳定剂。在2~8度保持稳定直至失效。
7. 四甲基联苯胺TMB-一瓶15ml装。备用。3,3,5,5＇＇-TMB和枸酸盐缓冲液（pH 3.5-3.8）内的过氧化氢的混合物。在2~8ºC保持稳定直至失效。
8. IgM阳性对照血清-一个黑色有盖的瓶子装有200 μL人血清（含有0.1%叠氮化纳和0.005%硫酸庆大霉素）。在2~8ºC保持稳定直至失效。
9. IgM标准血清-一个橙色有盖瓶子装有400μL人血清（内含0.1%叠氮化纳和0.005%硫酸庆大霉素）。在2~8ºC保持稳定直至失效。
10. IgM阴性对照血清-一个白色有盖的瓶子装有200 μL人血清（含有0.1%叠氮化纳和0.005%硫酸庆大霉素）。在2~8ºC保持稳定直至失效。
11. 终止液-一个瓶子15ml装。备用。1M磷酸。在2~25ºC保持稳定直至失效。
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