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高灵敏ECL发光试剂 Western Chemiluminescent HRP Substrate
Cat No. KTSM1901
简介：
本ECL试剂盒是基于鲁米诺（luminol）的高灵敏底物体系，用于在免疫印迹实验中检测辣根过物氧化酶（HRP）。试剂盒中的增强剂使得本试剂盒能检测fg至pg级抗原，背景干净。可以使用X光片或化学发光成像仪进行检测。由于本产品灵敏度高，检测丰度高的抗原，如actin等时，应适当降低一抗及二抗的浓度。
运输和保存条件：
室温运输。收到试剂后请避光，4度保存。室温保存时，底物可以稳定保存6个月；4度保存时，可以保存1年以上。
产品组成：
超敏ECL发光剂/增强剂，50ml
超敏ECL过氧化物/稳定剂，50ml
注意事项：
1. 为获得结果，请优化实验条件，包括样品，封闭试剂，洗涤液，一抗，二抗的选择及孵育时间等。
2. 在转膜，封闭，洗涤及一抗二抗孵育过程中防止膜干掉。
3. 为保证结果，请使用使用脱色摇床等设备，充分洗涤一抗二抗等。
4. 由于叠淡化钠YZHRP的活性，请尽量避免使用叠淡化钠,尤其在二抗孵育时，不能加叠淡化钠。
5. 与膜接触时，请使用干净的手套或镊子，避免蛋白污染。
6. 底物尽量现配现用。在室温条件下，配制好的底物可以稳定8小时。避免强光照射底物。短时间日光灯照射不影响配制好的底物的效果。
使用方法（X光片）：
1. 根据样品中抗原的浓度及一抗的效价，用一抗孵育印迹膜室温2小时或4度过夜。
2. 充分洗涤后，二抗室温孵育1小时。再充分洗涤后。
3. 按需要量将发光剂和过氧化物按11比例充分混匀得到发光物工作液。按1平方厘米印迹膜0.1ml工作液准备。
4. 弃去洗涤液，将工作液加到印迹膜上，孵育5分钟。
5. 将印迹膜取出，并吸去多余的工作液。
6. 将印迹膜放置于两层干净的保鲜膜或塑料保护壳之间，去除其中的气泡。
7. 将印迹膜吸附蛋白的面向上放置，置于X光片盒中，在暗室内压上X光片适当的时间。进行显影和定影。
使用方法（化学发光成像仪）：
1. 第1-5步与X光片方法相同。
2. 将印迹膜放置于成像仪的合适位置。
3. 选择信号累积模式采集信号。
常见问题，可能原因及解决方案
| 胶片反相（白色条带，黑色背景） | 系统中HRP过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 膜上出现棕色或黄色条带 |
| 暗室中看到强烈发光 |
| 发光信号持续时间过短 |
| 信号较弱或者无信号 | 发光反应系统中HRP过多，消耗底物过快，引起信号迅速降低 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 抗原/抗体量不够 | 增加抗原/抗体使用量 |
| 蛋白转移率低 | 优化转移系统 |
| 高背景 | 系统中HRP过量 | 稀释HRP标记物至少10倍以上 |
| 封闭不足 | 优化封闭程序 |
| 封闭试剂选择不当 | 选择另一种封闭试剂 |
| 冲洗不充分 | 增加冲洗时间，次数 |
| 曝光过度 | 减少曝光时间 |
| 抗原/抗体浓度过高 | 降低抗原/抗体使用浓度 |
| 蛋白条带为点状 | 蛋白转移失败 | 优化转移过程 |
| 膜未平衡 | 按照说明书处理膜 |
| 胶片与膜之间有气泡 | 曝光前去除所有气泡 |
出现非特异条带
（高背景、信号维持时间较短） | 系统中HRP过多 | 稀释HRP标记物 |
出现非特异条带
（背景干净信号维持时间正常） | 一抗用量过多 | 进一步稀释一抗 |
| SDS导致非特异结合 | 在实验过程中避免使用SDS |
产品组成：
超敏ECL发光剂/增强剂，50ml
超敏ECL过氧化物/稳定剂，50ml
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