活体成像用生物发光MCF10CA1a乳腺癌细胞

MCF10CA1a-DR乳腺癌

1.  细胞名称   MCF10CA1a-DR

2.  组织  乳腺癌细胞

3.  母细胞来源  ATCC

4.  病毒来源 逆转录病毒(自制含荧光素酶和GFP的逆转录病毒)

5.  转染方法与标记过程的描述（逆病毒制备、感染与筛选）

1.感染前消化细胞并计数，将细胞铺于10cm培养皿中，确保感染前细胞达到20%-30%的汇合度。

2.取4ml含逆转录病毒的培养基，加入40ul 10mg/ml的polybrene混合以0.45um滤膜过滤后加入细胞中。晃匀，37度孵化过夜。

3.移去含有逆转录病毒的培养基，加入10ml完全培养基，37度正常培养12小时。

4.重复2-3步，2-3个循环后用GFP的FACS筛选阳性细胞。

5. 阳性细胞系鉴定: 取1×104细胞，用裂解液裂解，加入荧光素酶作用底物，将转染质粒的细胞与阴性，阳性对照共同进行单报告基因检测。

6.  培养条件 ：置于37℃、5％CO2培养箱中，500ml DMEM/F12 (1:1) + 10ug/ml Insulin + 20ng/ml EFG + 0.5ug/ml Hydrocortizone + + 0.1ng/ml Cholera Toxin (can be omited) 25.0ml Horse Serum + 5ml Pen/strep，培养两天（密度大概80%）按照1：4的比例传代。

【注意事项】EFG，invitrogen公司，货号PHG0311，包装100μg；Hydrocortizone，默克公司，货号3867，包装1克。

7.  细胞传代所需时间：3天/代 

8.  筛选标记维持压力和选择压力：无。

9.  体外实验数据：1×10的4次方细胞裂解后，取1/4裂解液，Luciferase报告分析值在10的5次方以上。

10.      体内实验（进行皮下瘤或原位瘤的细胞接种条件）

裸鼠，10的5次细胞，原位注射，1个月可成瘤。