Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594说明书_详细资料

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细胞名称 Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594说明书

形态特性上皮样

生长特性贴壁生长

特征特性该细胞是采用慢病毒感染的方式使NCI-H1975细胞稳定表达Cas9-Flag-Neo，经400ug/mlG418筛选得到的单克隆，经Western Blotting验证该克隆可以表达Cas9蛋白，可直接用Crispr技术编辑基因组DNA。

培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS；400ug/ml G418

传代方法 1:3~1:6传代；每周换液2~3次。

传代情况 C3

冻存条件基础培养基+5%DMSO+20%FBS

细胞的种类：

Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594说明书是冻存产品，由液氮直接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的Z好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。

第二种：

是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。

质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，进口来源，保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。的冻存是细胞培养的基本操作，不同的实验室采用的方法略有差异，但是都会遵循慢冻速溶的宗旨。

细胞培养操作规程：

一Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594说明书．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

以下是 Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594说明书的相关产品：

5-胞苷三嶙酸四钠盐溶液25克

528-44-91,2,4-本三1,2,4-Benzenetricarboxylic acid

L-甘-甘-缬三肽10克RT，避光

二硅化钼 Molybdenum disiticide 12136-78-6 25G 通用试剂

磷钼酸 Phosphomolybdic Acid Hydrate 51429-74-4 25G 通用试剂

金丝桃酮，英文名或英文缩写：Hypericin，级别：超纯，98%，规格：1KU

D-葡萄糖醋内;五羌基己醋内 wo7ium D-gluconctq 1927/7/1

4-N-Boc-amino-3-fluoropxenylboronic acid 218301-87-2

苦参碱 Matrine (≥98%,HPLC) 519-02-8 20MG 标准品

D-脯酸/D-吡咯烷-2-羧酸/D-Proline BR，99% 10克国产/进口

赖酸铁琼脂shēng huà shì jì容量：RT100克

四丁基醋铵 Tqtrcbutylcmmonium ccqtctq 10234-29-2

5-metxoxy-2-nitnoaniline 16133-49-6

十八胺 Octadecylamine,≥99.0% 124-30-1 25G 通用试剂

SDS-PAGE蛋白质超低分子量多肽/SDS-PAGE超低分子量标准品/Super low range protein MW marker 3400～20100，液体,5条带 20次/160ul/支国产/进口

AFPA

Kanamycin esculin azide agar卡那霉素七叶苷叠氮琼脂 1.05222.0500 MERCK默克 incubation media Kanamycin esculin azide agar卡那霉素七叶苷叠氮琼脂 1.05222.0500 MERCK默克

胰蛋白胨大豆肉汤培养基 250g 可广泛应用于细菌的培养，特别用于消毒剂消毒效果的测试、金黄色葡萄球菌的非选择性增菌培养及蜡...

狗脂肪间质干细胞成软骨诱导分化完全培养基Thedogadiposederivedmesenchymalstemcellsintochondrocytesinduceddifferentiationofcompletemedium

Mn2+NutrientAgar

酚Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594说明书红葡萄糖肉汤250g用于蜡样芽孢杆菌葡萄糖分解试验(SN标准)

结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA) Violet Red Bile Agar 用于大肠菌群的固体平板检测(GB2008、SN标准)

甲基红指示剂盒 10ml*1 用于甲基红试验配套试剂

葡萄糖肉汤250g/瓶用于溶血性链球菌增菌incubationmedia葡萄糖肉汤250g/瓶用于溶血性链球菌增菌

山梨醇麦康凯琼脂添加剂 1ml*5 每200mlHB0121培养基中添加1支(含头孢克肟0.01mg和亚碲酸0.5mg)

注意事项：

1. Cas9稳定表达的人非小细胞肺腺癌细胞；NCI-H1975-Cas9-594说明书接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色

，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。

2.用75%的酒精消毒（建议配置75%的酒精的水是灭菌过的）。

3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。

4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。

7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。

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