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| 实验方法原理 | APAAP（Alkaline phosphatase-anti-alkaline phosphatase technique）技术的基本原理为：抗鼠IgG抗体作为桥梁，将鼠源性识别细胞抗原的DY抗体与鼠源性的抗碱性磷酸酶单克隆抗体-碱性磷酸酶复合物相连接，使之成为Ag，-Ab1－Ab2-anti AP-AP的复合物。还可通过二抗将APAAP 复合物重复叠加起来，从而使多个碱性磷酸酶标记于组织细胞上DY抗体所识别的抗原部位，提高了敏感性。 |
|---|---|
| 实验材料 | APAAP |
| 试剂、试剂盒 | TBS固定液 |
| 仪器、耗材 | 载玻片制片机湿盒显微镜 |
| 实验步骤 | 1. 分离外周血单个核细胞（PBMC），洗涤后用含10 ％FCS PMI1640调整细胞浓度约5×106 /ml
2. 自制制片机上制片，充分干燥
4. 自来水、蒸馏水依次冲洗
5. 用TBS稀释特异性McAb或阴性对照抗体（1∶50～500），每片加30～50 μl
6. 室温湿盒孵育30 min，或4 ℃冰箱湿盒中过夜
7. 充分用TBS冲洗后，加1∶50羊（兔）抗鼠IgG（GAM或RAM IgG）30～50 μl
8. 室温湿盒孵育30 min
9. TBS冲洗后加碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶（1∶2000）复合物（APAAP）
10. TBS冲洗后可重复叠加GAM或RAM IgG和APAAP2 次，每次孵育10 min
11. 冲洗后底物液显色10～15 min
12. 自来水冲洗，苏木精衬染，光镜下观察 展开 |
| 注意事项 | 1. 细胞表面抗原的强度以新鲜分离细胞制片、固定为好。若需保存干燥密封贮存于-20 ℃低温冰箱中，使用前必须充分干燥后固定。 展开 |
