10101ES80 HieffTM Taq DNA Polymerase DNA聚合酶

Hieff^TM Taq DNA Polymerase DNA聚合酶

产品信息

产品描述

Hieff^TM Taq DNA Polymerase是嗜热性Thermus aquaticus表达的热稳定重组型DNA聚合酶，分子量为94 KD。具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性，无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3′-dA，可直接用于TA克隆。

产品组分

产品应用

基因型鉴定、菌落PCR等常规PCR。

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制

核酸外切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ，74 ºC下孵育1 h，DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测：20 μL反应体系，10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA，74 ºC下孵育1 h，DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测: 50 μL体系中，加入2 U本品，以无菌ddH₂O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法

冰袋运输。-20 ºC保存。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

PCR反应体系（冰上配制）

【注】：1）Mg²⁺ 终浓度：Mg²⁺Z佳浓度为1.5-2 mM，如有需要，可0.2-0.5 mM为间隔向上摸索Mg²⁺Z佳使用浓度。

2）聚合酶添加：室温下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性，为了防止非特异性扩增，建议将聚合酶在Z后一步加到反应体系中。

3）聚合酶浓度：推荐使用0.04 U/μL。可以在0.025-0.04 U/ μL之间进行优化。

4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：

PCR扩增程序

【注】：1）预变性温度和时间：推荐使用94℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。

2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的Z适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。

HB171127