miRNA靶基因荧光素酶报告载体系列

通过与mRNAs在特异位点的结合，切割靶位点或YZ转录（翻译），MicroRNAs可调控基因表达。MiRNA与靶的相互作用是由RNA诱导的沉默复合体（RISC）介导的。RISC介导的成熟miRNA与位点相互作用依赖于miRNA和靶位点的序列互补性以及在3 ' UTR结合位点的总数量。 许多重要的调节基因受miRNAs调控，如Ers受let-7，Bcl-2受miR15和miR16，ERs 受miR206，TPM1受miR-21和PTEN受miR-19a调控。基于细胞分析方法的荧光素酶报告载体常用于监测受miRNAs调控的基因。
A. 优点:
功能性检测——是一种功能性的分析方法，用于监测细胞内miRNA介导的靶基因的调控
可定量分析——miRNAs介导的调控可以通过荧光素酶基因的表达进行定量监测
可构建稳定细胞系——载体可用于构建表达报告基因的稳定细胞系
B. 原理：
        pLuc-3UTR报告载体是一系列基于荧光素酶报告的构建体，用于监测miRNA介导的细胞内靶基因调控。每个载体含有CMV启动子、荧光素酶基因、3 ' UTR 靶基因和SV40终止子序列。MiRNA的表达并与3 ' UTR结合，导致荧光素酶基因表达的YZ。因此miRNA介导的特异靶的调控可通过荧光素酶活性进行监测。比较二个样本荧光素酶活性，可解析调控，明确差异。