果蝇基因表达双系统载体pUASTB

概述
我们的pUASTB载体系统是一个GX的转基因果蝇制备和基因表达控制系统。该系统能够利用果蝇P元件转座子系统（如pUAST）或噬菌体φC31整合系统（如pUASTattB）并结合强诱导型启动子Gal4调节转基因的表达。因此，pUASTB载体系统可用于P转座子和φC31整合酶介导目的基因插入。目的基因会被克隆到pUASTB两个P-元件末端重复序列中间和attB重组位点附近的区域。

为了实现P转座子介导的插入，将pUASTB质粒和表达P转座酶的辅助质粒共同导入宿主细胞或胚胎中。 接着，由辅助质粒产生的转座酶识别pUASTB质粒上的两个P元件末端重复序列，并将包含两个P元件末端重复之间的序列插入宿主基因组中。

为了实现φC31整合酶介导的插入，将pUASTB质粒和表达φC31整合酶的辅助质粒共同导入宿主细胞或含有attP位点的胚胎中。φC31整合酶介导attB和attP位点之间的不可逆重组，导致pUASTB载体线性化并整合到宿主基因组中。

mini white基因的表达，可以使果蝇的眼色发生变化，是鉴定转基因果蝇成功与否的标记。

在pUASTB系统中，目的基因将被克隆到合成诱导型启动子的下游，该启动子由5个串联排列的GAL4结合位点（5xUAS）和hsp70 TATA box组成。目的基因依赖于GAL4的表达，GAL4蛋白在与pUAST质粒上的UAS位点结合后会激活目的基因的转录。因此，在没有GAL4表达的情况下，目的基因保持沉默，但是通过与表达GAL4的果蝇系杂交后，在GAL4表达的细胞中，目的基因会被转录激活。

亮点