基因组文库(Genomic Library)构建实验服务

实验技术简介：用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA，可以得到大量的基因 组DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片 段，整个克隆群体就包含基因组的全部基因片段总和称为基因组文库。

实验操作流程：基因组DNA文库包括了基因组所有顺序的随机克隆片段。一个好的 基因组DNA文库的大小应足够大，以便包括所有的基因DNA顺序。DNA克隆片段也应足够大，其中包括整个基因、连接基因及它们稳定形式所要的侧翼顺序。 为了获得高的克隆效率和较大的插入片段，λ噬菌体载体和质粒经常被使用构建基因组DNA文库。λ噬菌体文库易于操作，噬菌体载体上有多克隆位点。λ噬菌体 能容纳10-50kb插入DNA，载体类型应根据所要基因组DNA片的大小和用途来选择。
构建一个基因组DNA文库的基本步骤：
1、分离纯化基因组DNA；
2、切割DNA成合适大小的片段以用于克隆；
3、载体DNA的制备；
4、把基因组DNA片段和载DNA连接；
5、包装重组分子；
6、测定入噬菌体滴度；
7、扩增DNA文库；
8、评估文库的质量。

实验注意事项：

客户提供：

高质量的基因组DNA(基因组DNA>1 mg)或者相应的动物、植物、微生物等组织和细胞材料

交付标准：

1、基因覆盖度达到10倍以上，针对Fosmid文库，平均插入片段>30 kb，针对普通基因组文库，平均插入片段1-2kb，且重组率 >90%
2、普通基因组文库/Fosmid基因组文库菌株(含20%甘油的SOC培养基)和文库构建报告(包括总克隆数CFU的鉴定图，文库单克隆鉴定图)

3、可根据客户的需要进行Fosmid DNA末端测序

其他：
1、电泳时，要选用合适的DNA Ladder，以保证电泳后可以准确定位所需分子量的DNA。
2、电泳以后，应尽量缩短用紫外光照射目标DNA的时间，否则会显著降低克隆效率。
3、回收DNA的时候，应该要避免过度离心，以防止DNA被剪切，降低文库质量。