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WB,IH,IF,ICC实验外包服务

产品信息

  • 实验步骤:
    1).收集约1×106--107细胞(贴壁细胞用PBS洗一遍,胰酶消化后离心,悬浮细胞直接离心);
    2).洗涤细胞:用预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀,取少量细胞用于计数,剩余细胞2000rpm,4°C离心5min,弃上清。
    3).预处理:加入1-2.5ml临用前添加了PMSF的线粒体分离试剂至细胞中,轻轻悬浮细胞,冰浴放置10—15min。
    4).把细胞悬液转移到玻璃匀浆中,匀浆20下左右,把细胞匀浆2000rpm,4°C离心10min。
    5).小心把上清转移到另一离心管中,12000rpm,4°C离心10min。
    6).小心去除上清,沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
    7).在分离得到的线粒体样品中加入150—200ul临用前添加了PMSF的线粒体裂解液裂解线粒体,裂解后的线粒体可以用于PAGE、Western、IP及线粒体中的酶活性检测。
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