CRISPR/Cas9敲除技术的原理是Cas9结合到sgRNA上，sgRNA的引导序列与基因组DNA中的靶标序列结合，Cas9切割靶标序列产生双链断裂，迫使细胞进行紧急修复，通常条件下，细胞偏向于使用非同源末端连接(NHEJ:nonhomologous DNA end joining）的方式对断裂的双链进行修复，从而造成靶位点基因的插入或缺失突变，发生移码突变可以完全敲除目标蛋白。 CRISPR/Cas9基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破，具有操作简便，周期短，敲除效率高，作用靶点多，无基因、细胞及物种限制，目的基因的大小不受限制，不受转录本数量影响等优势，逐渐成为基因敲除的标准操作工具。
