大鼠食管平滑肌细胞提取物【Rat Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】品Pai

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大鼠食管平滑肌细胞提取物【Rat Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】品Pai
大鼠食管平滑肌细胞提取物是从大鼠食管平滑肌细胞提取的，大鼠食管平滑肌细胞从正常大鼠食管组织制备。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人椎间盘髓核组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

大鼠食管平滑肌细胞提取物【Rat Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】品Pai细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
大鼠食管平滑肌细胞提取物【Rat Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】品Pai细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

1g/5g/25g原装AlbuminEggSigma A5378
（卵清蛋白
(鸡)）
1g/5gAlcianBlue8GXAmresco分装
（阿尔新蓝,阿利新兰）
5g/10gAlloxanSigma分装
（四氧嘧啶）
10mg/25mg/100mgAmethopterinSigma A6770
（氨甲喋呤）
大鼠食管平滑肌细胞提取物【Rat Esophageal: Normal Esophageal Smooth Muscle Cell Derivatives】品PaiCD48 Others Rat 大鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 人细胞裂解液 (阳性对照)
人癌细胞;AsPC-1
兔间质干细胞 Rabbit bone marrow mesenchymal stem cells
SF-295细胞，人XG恶性胶质瘤细胞 毛霉 人肠平滑肌细胞RNAHISMC miRNA5 μg
SF126(人脑瘤细胞) 5×106cells/瓶×2
HCC827(人非小细胞肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0385MFC-GFP(小鼠前胃癌细胞(绿色荧光蛋白标记))5×106cells/瓶×2 非洲绿猴肾细胞;CV-1