YS-E000020 呋喃唑酮代谢物（AOZ）ELISA检测试剂盒

【概要】

    硝基呋喃类药物因有非常好的KJ作用和药动力学的特性，曾经被广泛应用，作为禽类、水产和猪促生长的添加剂。但在长时间的实验研究过程中发现，硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变，正因为如此才导致此类药物禁止在ZL和饲料中使用。

    由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢，而在组织中结合的代谢产物则能存留较长的一段时间，所以在分析此类药物的残留时经常要分析其代谢后的产物，管理部门就以检测代谢产物为手段达到检测硝基呋喃类残留的目的。

      用来检测呋喃唑酮代谢物的Z常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。酶联免疫方法结合了色谱技术，采用AOZ衍生物的特异性抗体，具有很高的精确度和灵敏度，较低的操作技术要求和短暂的检测时间，检测样本量大等特点在检测中很好的表现出来。

【试验原理】

本试剂盒采用间接竞争一步法。在酶标板中同时加入校准品（或样本）、酶结合物及抗体，酶标板上包被的抗原与加入的校准品（或样本）中的抗原竞争结合加入的抗体，同时酶结合物与抗体结合。用 TMB 底物显色，样本吸光值与其残留物呋喃唑酮浓度呈负相关，与校准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样本中呋喃唑酮的含量。

【适用范围】

可定性、定量检测动物组织（鸡、猪、鱼、虾等）中呋喃唑酮代谢物的残留量。

【交叉反应率】

呋喃唑酮代谢物…………………………………………

呋喃西林代谢物…………………………………小于0.1%

呋喃它酮代谢物…………………………………小于0.1%

呋喃妥因代谢物…………………………………小于0.1%

呋喃西林………………………………………………小于1%

呋喃它酮………………………………………………小于1%

呋喃妥因………………………………………………小于1%

【使用单位需自备的设备及试剂】

设备：

┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm

┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置

┅┅均质器

┅┅振荡器

┅┅涡旋仪

┅┅离心机

┅┅天平：感量0.01g

┅┅刻度移液管：10ml

┅┅洗耳球 

┅┅容量瓶：100ml、500ml

┅┅玻璃试管：10ml

┅┅聚苯乙烯离心管：50ml 

┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、100ml～1000ml

多道 250ml

试剂：

┅┅乙酸乙酯(分析纯)

┅┅正己烷（或正庚烷）(分析纯)

┅┅三水合磷酸氢二钾(分析纯)

┅┅浓盐酸 

┅┅氢氧化钠(分析纯)

┅┅去离子水

【提供的材料与试剂】

1、96孔酶标板×1块 （包被有偶联抗原）

2、标准液×6瓶：（1ml/瓶）

0ppb，0.05ppb，0.15ppb，0.45ppb，1.35ppb，4.05ppb 

3、高浓度标准品：（1ml/瓶） 50ppb

4、抗体工作液         7ml …………………… 蓝色帽

5、酶结合物        7ml…………………… 红色帽

6、底物A 液       7ml …………………… 红色帽

8、底物 B 液       7ml …………………… 黑色帽

9、终 止 液          7ml …………………… 黄色帽

10、20×浓缩洗涤液    50ml……………………… 透明帽

11、2×浓缩复溶液      50ml……………………… 透明帽

12、2-硝基苯甲醛      15.1mg…………………… 蓝色帽

【检测方法灵敏度、准确度、精密度】

试剂盒灵敏度：0.05ppb

样本Z低检测限：

组织样品检测下限……………………………………0.1ppb 

准确度：

水产、肌肉、肝脏组织 …………………………… 80~120%         

精密度：

试剂盒的变异系数均小于10%

【注意事项】

1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3、每加一种试剂前需要将其摇匀。

4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

5、不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6、储存条件

保存试剂盒于2-8℃，不要冷冻，将不用的微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

7、试剂变质的迹象

发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5 ）时，表示试剂可能变质。

8、在加入底物A液和底物B液后，一般显色15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min（或更长），但不得超过30min。反之，则减短反应时间。

【贮藏条件及保存期】

 贮藏条件：保存试剂盒于2~8℃，切勿冷冻。

保存期：该产品有效期为12个月。

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